Vitamin B12 For use on the IMMULITE and IMMULITE 1000 systems - Diagnostic Products Corporation
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Vitamin B12 For use on the IMMULITE® and IMMULITE® 1000 systems
IMMULITE /IMMULITE 1000 Vitamin B12
® ®
6
near absence of intrinsic factor. Since
English roughly two thirds of all patients with
pernicious anemia have blocking
antibodies to intrinsic factor (IFbAb), while
Intended Use: For in vitro diagnostic use IFbAb are only very rarely encountered in
with the IMMULITE and IMMULITE 1000 other situations, IFbAb determinations
Analyzers — for the quantitative represent a useful follow-up test for the
measurement of vitamin B12 in serum or differential diagnosis of vitamin B12
4,8,10
heparinized plasma, as an aid in clinical deficiency. (Circulating intrinsic factor
diagnosis and treatment of anemia. antibodies are present in more than half of
Catalog Number: LKVB1 (100 tests), all pernicious anemia patients. Increased
LKVB5 (500 tests) transport protein levels can occur, for
example, in chronic myelogenous
Test Code: VB Color: Violet leukemia.)
Common causes of high vitamin B12
Summary and Explanation levels include liver disease,
Vitamin B12 (cobalamin) and folate are myeloproliferative disease (with chronic
6
nutrients essential to hematopoiesis. myelogenous leukemia as a special case)
Megaloblastic anemia is almost always and the use of multivitamin supplements.
6
due to lack of one of these two vitamins.
Vitamin B12 deficiency can also result in Principle of the Procedure
1,2,7
severe neurological impairment.
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12
Circulating levels of vitamin B12 are is a solid-phase, competitive
usually a good index to tissue stores. That chemiluminescent enzyme immunoassay.
is, vitamin B12 levels as measured in
serum or plasma by an optimized assay IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12
system are typically low in vitamin B12 involves a preliminary heat denaturation
deficiency, and normal or elevated step. Vitamin B12 in the patient sample is
1
otherwise. Exceptions to this rule can released from carrier proteins by
occur in those relatively uncommon incubation at 100°C in the presence of
situations where levels of vitamin B12 dithiothreitol and potassium cyanide to
2
transport proteins are abnormal. Thus, inactivate vitamin B12-binding proteins,
low circulating vitamin B12 levels can even at extreme levels, as well as
occur in the absence of vitamin B12 antibodies to intrinsic factor.
deficiency where the level of After the heat denaturation step, the
transcobalamin I (a physiologically inactive treated patient sample and hog intrinsic
8
transport protein) is low. factor are simultaneously introduced into
Conversely, vitamin B12 deficiency can an IMMULITE/IMMULITE 1000 Test Unit
occur in the presence of normal or even containing a polystyrene bead coated with
elevated plasma vitamin B12 levels, where a B12 analog, and incubated for
transcobalamin II levels are low or where approximately 30 minutes at 37°C with
levels of inactive vitamin B12 transport intermittent agitation. During this
proteins are high, as in chronic incubation, vitamin B12 in the treated
myelogenous leukemia.
5,8,11
(Circulating sample competes with the B12 analog on
folate levels are usually normal or the solid phase for a limited number of
elevated in vitamin B12 deficiency, but red vitamin B12 binding sites on the purified
cell folate levels are frequently low in this intrinsic factor. (Endogenous vitamin B12
10
condition. ) analogs do not interfere, because the
binder is free of R-protein.) Alkaline
Vitamin B12 deficiency occurs only rarely phosphatase-labeled anti-hog intrinsic
3,6
as a result of dietary lack of this vitamin. factor is introduced, and the Test Unit is
More commonly, it results from impaired incubated for another 30-minute cycle.
absorption, as in partial or total The unbound enzyme conjugate is
gastrectomy, or in pernicious anemia, a removed by a centrifugal wash.
condition characterized by absence or
2 IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18)Incubation Cycles: 2 × 30 minutes. calibration range of 100 to 1,200 pg/mL
(74 to 885 pmol/L). All samples expected
Specimen Collection to have vitamin B12 levels greater than
this value should be diluted with Vitamin
Note: If sample is to be analyzed for both
B12 Sample Diluent before assay.
vitamin B12 and folic acid, the patient
18
must be in a fasting state.
Warnings and Precautions
Although neither bilirubin nor hemolysis
For in vitro diagnostic use.
has any clinically significant effects on the
vitamin B12 results, the presence of Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of in
hemoglobin in the sample will increase accordance with applicable laws.
folic acid values. Additionally, hemolysis The Borate-KCN Buffer Solution contains
may indicate mistreatment of the cyanide. Extreme care must be taken to
specimen before receipt by the laboratory, avoid all bodily contact with this reagent.
hence the results should be interpreted
with caution. Follow universal precautions, and handle
all components as if capable of
Because EDTA has a significant effect on transmitting infectious agents. Source
results, it should not be used as an materials derived from human blood were
anticoagulant. tested and found nonreactive for syphilis;
The use of an ultracentrifuge is for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis
recommended to clear lipemic samples. B surface antigen; and for antibodies to
hepatitis C.
Centrifuging serum samples before a
complete clot forms may result in the Sodium azide, at concentrations less than
presence of fibrin. To prevent erroneous 0.1 g/dL, has been added as a
results due to the presence of fibrin, preservative. On disposal, flush with large
ensure that complete clot formation has volumes of water to prevent the buildup of
taken place prior to centrifugation of potentially explosive metal azides in lead
samples. Some samples, particularly and copper plumbing.
those from patients receiving Chloramphenicol, at concentrations less
anticoagulant therapy, may require than 0.1 g/dL has been added as a
increased clotting time. preservative. Chloramphenicol is known
Blood collection tubes from different to cause cancer; this disclosure is required
manufacturers may yield differing values, by the state of California.
depending on materials and additives, Chemiluminescent Substrate: Avoid
including gel or physical barriers, clot contamination and exposure to direct
activators and/or anticoagulants. sunlight. (See insert.)
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12
has not been tested with all possible Water: Use distilled or deionized water.
variations of tube types. Consult the
section on Alternate Sample Types for Materials Supplied
details on tubes that have been tested. Components are a matched set. The
Volume Required: 200 µL of sample — barcode labels are needed for the assay.
serum or plasma — is required for the
sample pretreatment step. A single Vitamin B12 Test Units (LVB1)
determination uses 100 µL of the treated Each barcode-labeled unit contains one
sample: the sample cup should contain at bead coated with vitamin B12 analog.
least 250 µL more of the treated sample Stable at 2–8°C until expiration date.
than the total volume required for the LKVB1: 100 units. LKVB5: 500 units.
number of vitamin B12 determinations to Allow the Test Unit bags to come to room
be performed. temperature before opening. Open by
Storage: If not assayed within 8 hours, cutting along the top edge, leaving the
14
store at –20°C: stable for 6-8 weeks. ziplock ridge intact. Reseal the bags to
Avoid excessive exposure to direct light. protect from moisture.
Dilution of High Samples: The
IMMULITE Vitamin B12 procedure has a
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18) 3Vitamin B12 Reagent Wedges (LVBA, LSUBX: Chemiluminescent Substrate
LVBB) LPWS2: Probe Wash Module
With barcodes LVBA: one wedge (7.5 mL) LKPM: Probe Cleaning Kit
containing vitamin B12 binding protein LCHx-y: Sample Cup Holders (barcoded)
(purified hog intrinsic factor), with LSCP: Sample Cups (disposable)
preservative. LVBB: one wedge (7.5 mL) LSCC: Sample Cup Caps (optional)
containing alkaline phosphatase (bovine CON6: Tri-level, multi-constituent control
calf intestine) conjugated to murine
monoclonal anti-hog intrinsic factor Also Required
antibody in buffer, with preservative. Store Sample transfer pipets, distilled or
capped and refrigerated: stable at 2–8°C deionized water, controls.
until expiration date. Recommended Plain 12×75 mm polypropylene tubes, with
usage is within 30 days after opening loose-fitting caps — available from DPC.
when stored as indicated.
LKVB1: 1 set. LKVB5: 5 sets. Micropipets: 20, 200, and 1,000 µL. For
the 1 mL reagent addition, a reliable
Vitamin B12 Adjustors (LVBL, LVBH) repeating dispenser is suitable.
Two vials (Low and High) of lyophilized Plastic container with lid (for preparing the
vitamin B12 in a human protein-based Working Solution).
matrix, with preservative. Reconstitute
Foil — or other means for protecting the
each vial with 4.0 mL distilled or deionized
hemolysates from light.
water. Mix by gentle swirling or inversion
until the lyophilized material is fully Covered boiling waterbath (100°C). Do not
dissolved. Stable at 2–8°C for 30 days use an oven or a heat block.
after reconstitution, or for 6 months Ambient temperature waterbath — for
(aliquotted) at –20°C. cooling the tubes after the boiling step.
LKVB1: 1 set. LKVB5: 2 sets.
3.0 mL volumetric pipet (± 0.02 mL) for
Note: The Adjustors must be subjected to
reconstitution of Adjustors.
the same heat denaturation step as
patient samples. (See Sample
Pretreatment section.) Preparation of Working
Solution
Borate-KCN Buffer Solution (LBCN) Note: Samples being tested for both
125 mL of Borate-KCN Buffer Solution, vitamin B12 and folic acid must be
with preservative. Stable at 2–8°C for 30 pretreated with the Working Solution
days after opening. described in the package insert for
LKVB1: 1 vial. LKVB5: 5 vials. IMMULITE Folic Acid, catalog number
Caution! Contains cyanide. Extreme care LKFO.
must be taken to avoid all bodily contact The amount of each component depends
with this reagent. on the number of tests to be performed.
The volumes required, in microliters per
Dithiothreitol Solution (LDTT) test, are tabulated below. Be sure to
3 mL of a dithiothreitol solution. Stable at multiply these volumes by a number
2–8°C for 30 days after opening. slightly greater than the number of tests to
LKVB1: 1 vial. LKVB5: 5 vials. be run. (The components are supplied in
volumes sufficient for making up the
Kit Components Working Solution in approximately a 20%
excess.)
Supplied Separately
µL/test
Vitamin B12 Sample Diluent (LVBZ)
For the manual dilution of patient samples. Borate-KCN Buffer Solution 1,000
One vial containing 25 mL of human Dithiothreitol Solution 20
serum protein-based diluent, with
preservative. Stable at 2–8°C for 30 days
after opening, or for 6 months (aliquotted) Important: The Working Solution should
at –20°C. be prepared on a daily basis. If not used
immediately, it should be refrigerated at
4 IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18)2–8°C for a period of not more than Quality Control Samples: Use controls
24 hours. or serum pools with at least two levels
(low and high) of vitamin B12.
Sample Pretreatment
1. Pipet 200 µL of each Adjustor, Expected Values
control, or patient sample — serum Serum samples from 245 apparently
or plasma — into the tubes prepared. healthy male and female blood donors
who had not donated blood within the last
For patient samples expected to
have vitamin B12 levels above the 12 months, and 147 serum samples from
apparently healthy volunteers were
assay's calibration range, dilute the
processed with the IMMULITE Vitamin
serum or plasma with Vitamin B12
Sample Diluent. B12 assays, yielding a reference range of
174 to 878 pg/mL (128 to 648 pmol/L)
2. Add 1,000 µL of the Working Solution
to all tubes. Vortex. Consider these limits as guidelines only.
3. Loosely cap all tubes and place them Each laboratory should establish its own
reference ranges.
in a covered, boiling waterbath
(100°C) for 15 – 20 minutes.
Limitations
4. Remove the tubes from the boiling
waterbath, and cool them in an EDTA plasma is not recommended for
ambient waterbath for 5 minutes. use.
5. Pipet at least 350 µL of the treated Heterophilic antibodies in human serum
sample to an IMMULITE/IMMULITE can react with the immunoglobulins
1000 Sample Cup. included in the assay components causing
interference with in vitro immunoassays.
Treated samples, both serum and plasma, [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic
are stable at room temperature 15 – 28°C antibodies: a problem for all
or refrigerated at 2 – 8°C for 1 hour prior immunoassays. Clin Chem 1998:34:27-
to assay. Note that commercial controls 33.] Samples from patients routinely
may show variable stability after exposed to animals or animal serum
treatment. products can demonstrate this type of
interference potentially causing an
Assay Procedure anomalous result. These reagents have
Note that for optimal performance, it is been formulated to minimize the risk of
important to perform all routine interference; however, potential
maintenance procedures as defined in the interactions between rare sera and test
IMMULITE or IMMULITE 1000 Operator's components can occur. For diagnostic
Manual. purposes, the results obtained from this
assay should always be used in
See the IMMULITE or IMMULITE 1000 combination with the clinical examination,
Operator's Manual for: preparation, setup, patient medical history, and other findings.
adjustment, assay and quality control
procedures.
Performance Data
Visually inspect each Test Unit for the See Tables and Graphs for data
presence of a bead before loading it onto representative of the assay's performance.
the system. Results are expressed in pg/mL. (Unless
Note that both Reagent Wedges A and B otherwise noted, all were generated on
must be loaded on the carousel to run this serum samples collected in tubes without
assay. anticoagulants, gel barriers or clot-
promoting additives.)
Each Sample cup holder can be followed
by up to four test units. Conversion Factor:
Recommended Adjustment Interval: pg/mL × 0.7378 → pmol/L
2 weeks. Calibration Range: 100 – 1,200 pg/mL
(74 – 885 pmol/L).
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18) 5Analytical Sensitivity: 50 pg/mL human IgG, were assayed. (See "Protein
(37 pmol/L). Effect" table for results.)
Intraassay Precision (Within-Run): Method Comparison 1: The assay was
®
Statistics were calculated for samples compared to DPC's Dualcount Solid
from the results of 15 replicates in a single Phase No Boil (SPNB) assay on 98
run. (See “Intraassay Precision” table.) patient serum samples. (Concentration
Interassay Precision (Run-to-Run): range: approximately 90 to 1,143 pg/mL.
See “Method Comparison 1” graph.) By
Statistics were calculated for samples
linear regression:
assayed in 10 different runs. (See
“Interassay Precision” table.) (IML) = 0.99 (SPNB) + 19.1 pg/mL
r = 0.982
Linearity: Samples were assayed under
various dilutions. (See "Linearity" table for Means:
385 pg/mL (IMMULITE)
representative data.) 371 pg/mL (SPNB)
Recovery: Samples spiked 1 to 19 with Method Comparison 2: The IMMULITE
four vitamin B12 solutions (2,160, 3,640, Vitamin B12 procedure was also
5,460 and 7,640 pg/mL) were assayed. compared to a commercially available
(See "Recovery" table for representative radioimmunoassay (Kit A) on 101 patient
data.) serum samples. (Concentration range:
Specificity: As one test of the specificity approximately 102 to 1,218 pg/mL. See
of the purified intrinsic factor binder, “Method Comparison 2” graph.) By linear
mixtures of vitamin B12 analogs regression:
(containing mostly cobinamide) were (IML) = 0.91 (Kit A) + 19.5 pg/mL
assayed for vitamin B12 by the IMMULITE r = 0.965
Vitamin B12 assay. The results showed no
Means:
crossreactivity with cobinamide, even at 396 pg/mL (IMMULITE)
concentrations as high as 412 pg/mL (Kit A)
1,800,000 pg/mL and 50,000,000 pg/mL.
Bilirubin: Presence of bilirubin in References
concentrations up to 200 mg/L has no
effect on results, within the precision of the 1) Allen RH. Clinical role and current status of
serum cobalamin (Vitamin B12) assays. Ligand
assay. Quarterly 1981 Fall;4(3):37-44, 67. 2) Carmel R.
Hemolysis: Presence of hemoglobin in Megaloblastic anemia: vitamin B12 and folate.
concentrations up to 381 mg/dL has no In: Fairbanks VF, editor. Current hemotology.
New York: John Wiley, 1983: 243-80. 3) Colman
effect on results, within the precision of the
N. The radioisotopic investigation of anemia.
assay. Ligand Quarterly 1981 Fall;4(3):24-30. 4)
Lipemia: Presence of triglycerides in Dawson DW. Diagnosis of vitamin B12
concentrations up to 3,000 mg/dL has no deficiency. Br Med J 1984;289:938-9. 5)
Grsbeck R. Biochemistry and clinical chemistry
effect on results, within the precision of the of vitamin B12 transport and the related
assay. diseases. Clin Biochem 1984;17:99-107. 6)
Alternate Sample Type: Samples (n=22) Herbert V. The nutritional anemias. Hosp Pract
1980 Mar;15(3):65-83, 87-9. 7) Herbert V.
collected into plain and heparinized
Biology of disease: megaloblastic anemias. Lab
vacutainer tubes were assayed: Invest 1985;52:3-19. 8) Kapadia CR, Donaldson
(Heparin) = 0.95 (Serum) + 8.5 pg/mL RM. Disorders of cobalamin (vitamin B12)
r = 0.987 absorption and transport. Ann Rev Med
1985;36:93-110. 9) Kolhouse JF, et al.
Means: Cobalamin analogues are present in human
474 pg/mL (Serum) plasma and can mask cobalamin deficiency
460 pg/mL (Heparin) because current radioisotope dilution assays are
Because EDTA would have a significant not specific for true cobalamin. New Engl J Med
effect on results, it should not be used as 1978;299:785-92. 10) Lindenbaum J. Status of
laboratory testing in the diagnosis of
an anticoagulant. megaloblastic anemia. Blood 1983;61:624-7. 11)
Protein Effect: Two patient serum Parry TE. The diagnosis of megaloblastic
samples, spiked with varying amounts of anemia. Clin Lab Haematol 1980;2:89-109. 12)
Mollin DL, Ross GIM. Serum vitamin B12
human serum albumin (HSA) and normal
concentrations in leukemia and in some other
6 IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18)hematological conditions. Brit J Haemat
1995;1:155-72. 13) Gilbert HS, et al. Serum
vitamin B12 content and unsaturated vitamin
Tables and Graphs
B12 binding capacity in myeloproliferative
disease. Ann Intern Med 1969;71:719-29. 14)
Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory Intraassay Precision (pg/mL)
tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders,
1995:636. 15) National Committee for Clinical Mean1 SD2 CV3
Laboratory Standards. Procedures for the
collection of diagnostic blood specimens by 1 123 14 11.4%
venipuncture; approved standard. 4th ed. 2 159 18 11.3%
NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS,
1998. 16) Food and Drug Administration (FDA), 3 204 21 10.3%
Letters from the Bureau of Medical Devices 4 401 27 6.7%
(BMD) to manufacturers of Vitamin B12
radioassay kits. April 1980, January 1981. 17) 5 736 39 5.3%
National Committee for Clinical Laboratory 6 1,308 77 5.9%
Standards (NCCLS). Guidelines for evaluating a
B12 (cobalamin) assay. (Villanova, PA: NCCLS
proposed standard PLSA-12, March 1979).
Revised as "NCCLS recommendations with
Interassay Precision (pg/mL)
respect to vitamin B12 assays" — presented to
the Food and Drug Administration (FDA) panel, Mean1 SD2 CV3
9 July 1979. 18) Chanarin I. The megaloblastic
anemias. 2nd ed. Oxford: Blackwell Scientific, 1 131 22 17%
1979. 19) Zucker RM, Podell E, Allen RH. 2 310 23 7.4%
Multiple problems with current no-boil assays for
serum cobalamin. Ligand Quarterly 1981 3 660 40 6.1%
Fall;4(3):52-8. See further: letters by Ziering S, 4 1,192 202 17%
et al, and by Zucker RM, et al, ibid, 60-3, and by
Allen RH, ibid, 1982 Spring;5(1):48-9. 20)
Kubasik NP, Ricotta M, Sine HE. Commercially-
supplied binders for plasma cobalamin (vitamin
B12) analysis — "purified" intrinsic factor, Linearity (pg/mL)
"cobinamide"-blocked R-protein binder, and non-
Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4
purified intrinsic factor-R-protein binder —
5
compared to microbiological assay. Clin Chem 1 8 in 8 558 — —
1980;26:598-600.
4 in 8 229 279 82%
2 in 8 140 140 100%
Technical Assistance
1 in 8 77 70 110%
In the United States, contact DPC's
Technical Services department. 2 8 in 8 1,052 — —
Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828 4 in 8 561 526 107%
Fax: 973.927.4101. Outside the United 2 in 8 270 263 103%
States, contact your National Distributor.
1 in 8 147 132 111%
The Quality System of Diagnostic Products
Corporation is registered to ISO 13485:2003.
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18) 7Recovery (pg/mL) Method Comparison 1
1 2 3 4
Solution Observed Expected %O/E 1,200
1 — 250 — — 1,000
IMMULITE Vitamin B12
A 323 346 93%
800
B 408 420 97%
600
C 550 511 108%
D 711 620 115% 400
2 — 527 — — 200
A 627 609 103% 0
0 200 400 600 800 1,000 1,200
B 723 683 106%
SPNB, pg/mL
C 815 774 105%
(IML) = 0.99 (SPNB) + 19.1 pg/mL
D 880 883 100% r = 0.982
3 — 816 — —
A 830 883 94% Method Comparison 2
B 903 957 94%
C 1,000 1,048 95%
1,200
D 1,122 1,157 97%
IMMULITE Vitamin B12
1,000
800
Protein Effect (pg/mL) 600
400
Vitamin B12,
Added1 pg/mL2 200
1 — 541 0
0 200 400 600 800 1,000 1,200
30 g/L HAS 494 Kit A, pg/mL
50 g/L HAS 493 (IML) = 0.91 (Kit A) + 19.5 pg/mL
20 g/L IgG 533 r = 0.965
30 g/L IgG 537
60 g/L IgG 412 Deutsch. Intraassay Precision: 1Mittelwert, 2S
(Standardabweichung), 3CV
50 g/L HSA plus (Variationskoeffizient). Interassay Precision:
517 1
30 g/L IgG Mittelwert, 2S (Standardabweichung), 3CV
(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,
2 — 854 2
Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8.
30 g/L HAS 800 Recovery: 1Probe, 2Beobachtet (B), 3Erwartet
(E), 4% B/E. Protein Effect: 1zugesetzt, 2Vitamin
50 g/L HAS 745 B12, pg/ml. Method Comparison: Vitamin B12:
20 g/L IgG 775 Vitamin B12.
30 g/L IgG 783 Español. Intraassay Precision: 1Media, 2DS,
3
CV. Interassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV.
60 g/L IgG 642 Linearity: 1Dilución, 2Observado (O), 3Esperado
50 g/L HSA plus (E), 4%O/E, 58 en 8. Recovery: 1Solución,
2
741 Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E. Protein
30 g/L IgG Effect: 1Added, 2Vitamin B12, pg/ml Method
Comparison: Vitamin B12: Vitamina B12.
Français. Intrraassay Precision: 1Moyenne,
2
SD, 3CV. Interassay Precision: 1Moyenne,
2
SD, 3CV. Linearity: 1Dilution, 2Observé (O),
3
Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8. Recovery:
1
Solution, 2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A.
Protein Effect: 1Added, 2Vitamin B12, pg/ml
Method Comparison: Vitamin B12: Vitamine
B12.
8 IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18)2
Italiano. intraassay Precision: 1Media, 2SD abnormal sind. Daher können erniedrigte
(Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di Vitamin B12 Spiegel im Serum auftreten,
Variazione). Interassay Precision: 1Media, 2SD auch wenn kein Vitamin B12-Mangel
(Deviazione Standard), 3CV (Coefficiente di
Variazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato
vorliegt, wenn die Spiegel des
(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Recovery: Transcobalamin I (eines physiologisch
1
Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A. inaktiven Transportproteins) erniedrigt
8
Protein Effect: 1Added, 2Vitamin B12, pg/ml sind.
Method Comparison: Vitamin B12: Vitamina
B12. Umgekehrt kann ein Vitamin B12 Mangel
1
trotz normalen oder leicht erhöhten
Português. Intraassay Precision: Média, Vitamin B12 im Serum vorliegen, wenn die
2
Desvio padrão, 3Coeficiente de variação.
Interassay Precision: 1Média, 2Desvio padrão,
Spiegel des Transcobalamin II niedrig,
3
Coeficiente de variação. Linearity: 1Diluição, oder die des inaktiven Transcobalamin I
2
Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8. erhöht sind (z.B. bei chronisch
5,8,11
Recovery: 1Solução, 2Observado (O), myeloischer Leukämie). (Die
3
Esperado (E), 4%O/E. Protein Effect: 1Added, Folsäurespiegel im Serum sind bei
2
Vitamin B12, pg/ml Method Comparison: Vitamin B12 Mangel meist normal oder
Vitamin B12: Vitamina B12. leicht erhöht, während die Erythrozyten-
folsäure in diesen Fällen gewöhnlich
10
erniedrigt ist).
Deutsch Ein Vitamin B12 Mangel resultiert selten
aus einer ungenügenden Zufuhr über die
3,6
Nahrung (Diät). Meist ist er das Ergebnis
einer gestörten Resorption, wie in Fällen
IMMULITE Vitamin B12 einer partiellen oder totalen Gastrektomie,
Anwendung: Zur in vitro-Diagnostik oder einer perniziösen Anämie, verursacht
unter Verwendung der IMMULITE und durch totalen oder partiellen Mangel an
6
IMMULITE 1000 Systeme – für die Intrinsic Faktor. Nahezu zwei Drittel der
quantitative Bestimmung von Vitamin B12 Patienten mit perniziöser Anämie weisen
im Serum oder Heparin-Plasma, als blockierende Antikörper gegen Intrinsic
Hilfestellung zur klinischen Diagnose und Faktor (IFbAb) auf während IFbAb sonst
Therapie von Anämien. nur sehr selten nachweisbar sind. IFbAb-
Bestimmungen sind sehr hilfreich für die
Artikelnummern: LKVB1 (100 Tests), Differential-diagnose des Vitamin B12
LKVB5 (500 Tests) Mangels.
4,8,10
(Zirkulierende IFbAb-Spiegel
Testcode: VB Farbe: Violett sind bei mehr als der Hälfte aller Patienten
mit perniziöser Anämie nachweisbar.
Klinische Relevanz Erhöhte Transportproteinspiegel können
z. B. bei chronisch myeloischer Leukämie
Vitamin B12 und Folsäure sind essentielle auftreten).
6
Faktoren der Hämatopoese. Eine
megaloblastäre Anämie ist in fast allen Häufige Ursache für hohe Vitamin B12
Fällen auf den Mangel eines dieser beiden Spiegel im Serum sind Leber-
6
Vitamine zurückführen. Ein Vitamin B12- erkrankungen, myeloproliferative
Mangel kann ebenfalls zu verschiedenen Erkrankungen (mit dem Spezialfall
neurologischen Beeinträchtigungen chronisch myeloische Leukämie) und der
führen.
1,2,7
Gebrauch von Multivitaminpräparaten.
Die zirkulierenden Vitamin B12 Spiegel
sind gewöhnlich ein guter Index für die Methodik
Gewebespeicher. Die im Serum oder Der Vitamin B12 – IMMULITE/IMMULITE
Plasma mittels eines optimierten Assays 1000-Test ist ein kompetitiver Festphasen-
gemessenen Vitamin B12 Spiegel sind bei Chemilumineszenz-Immunoassay.
einem Vitamin B12-Mangel gewöhnlich Der IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin
niedrig, bei anderen klinischen Situationen B12 beinhaltet einen
1
normal oder erhöht. Eine Ausnahme von Probenvorbehandlungsschritt des
dieser Regel kann in seltenen klinischen Patientenserums oder Plasmas. Das
Fällen auftreten, bei denen die Spiegel Vitamin B12 in der Probe wird von den
des Transportproteins für Vitamin B12 Transportproteinen durch Inkubation bei
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18) 9100°C in Anwesenheit von Dithiothreitol von Patienten unter Antikoagulantien-
(DTT) und Kaliumcyanid (KCN) gelöst, um therapie können eine verlängerte
Vitamin B12-Bindeproteine (auch in hohen Gerinnungszeit aufweisen.
Konzentrationen) und Antikörper gegen
Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen
den Intrinsic Faktor zu inaktivieren.
Herstellern können differierende Werte
Nach dem Hitzedenaturierungsschritt wird verursachen. Dies hängt von den
die vorbehandelte Patientenprobe verwendeten Materialien und Additiven
gemeinsam mit Intrinsic Faktor (Schwein) (Gel oder physische Trennbarrieren,
in ein IMMULITE/IMMULITE 1000- Gerinnungsaktivatoren und /oder
Testeinheit überführt, welches eine mit Antikoagulantien) ab.
einem Vitamin B12-Analog beschichtete IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12
Polystyrolkugel enthält und für 30 Minuten sind nicht mit allen möglichen
bei 37°C unter intermittierendem Schütteln Röhrchenvariationen ausgetestet worden.
inkubiert. Während dieses Details der getesteten Röhrchenarten sind
Inkubationsschrittes konkurriert das dem Kapitel "Alternative Probenarten" zu
Vitamin B12 in der vorbehandelten Probe entnehmen.
mit dem Vitamin B12-Analog um eine Erforderliche Menge: 200 µl Probe
limitierte zahl von Bindungsstellen an dem
(Serum oder Plasma) werden für den
gereinigten Intrinsic Faktor (Endogene
Vorbehandlungsschritt benötigt. Für eine
Vitamin B12-Analoga interferieren nicht, Einzelbestimmung sind 100 µl der
da der Binder frei von R-Protein ist).
vorbehandelten Probe notwendig. Das
Anschließend wird mit alkalischer
Probenröhrchen muss aber mindestens
Phosphatase markierter anti-Schwein- 250 µl mehr an vorbehandelter Probe
Intrinsic Faktor zugegeben und das
enthalten als für die Bestimmung selbst
Testeinheit für weitere 30 Minuten
benötigt wird, da ein bestimmtes
inkubiert. Ungebundenes Enzymkonjugat Überschussvolumen für die Vitamin B12-
wird durch zentrifugales Waschen Bestimmungen gebraucht wird.
entfernt.
Lagerung: 8 Stunden bei 2–8°C oder
Inkubationszyklen: 2 × 30 minuten 14
6–8 Wochen bei –20°C. Da Vitamin B12
lichtempfindlich ist, ist eine direkte
Probengewinnung Einwirkung von Licht auf die Proben ist zu
Bitte beachten: Sollen aus der vermeiden!
Patientenprobe gleichzeitig Vitamin B12 Verdünnung von Proben mit hoher
und Folsäure bestimmt werden, muss der Vitamin B12-Konzentration: Der
18
Patient nüchtern sein. IMMULITE Vitamin B12-Assay hat einen
Weder Bilirubin noch Hämolyse haben Kalibrationsbereich von 100 – 1 200 pg/ml
einen klinisch signifikanten Effekt auf den (74–885 pmol/l). Alle Proben mit
Assay. Hämolytische Proben geben einen Konzentrationen > 1 200 pg/ml müssen
Hinweis auf eine fehlerhafte vor der Bestimmung mit Vitamin B12-
Probenbehandlung in der präanalytischen Verdünnungspuffer (LVBZ) verdünnt
Phase. Daher sollten solche Proben mit werden.
Vorsicht interpretiert werden.
Da EDTA einen signifikanten Effekt auf die Hinweise und
Ergebnisse hat, kann es nicht als Vorsichtsmaßnahmen
Antikoagulanz verwendet werden. Zur In-vitro-Diagnostik.
Zur Klärung lipämischer Proben sollte eine Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. Unter
Ultrazentrifuge eingesetzt werden. Einhaltung der geltenden gesetzlichen
Die Zentrifugation der Serumproben vor Vorschriften entsorgen.
dem völligen Abschluss der Gerinnung Der Borat-KCN-Puffer enthält Cyanid.
kann zu Fibringerinnseln führen. Um Cyanid ist extrem giftig. Der Kontakt mit
fehlerhaften Analysenergebnissen infolge dieser Lösung sollte vermieden werden!
von Gerinnseln vorzubeugen, ist
sicherzustellen, dass die Gerinnung vor Die generell geltenden
der Zentrifugation der Proben vollständig Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten
abgeschlossen ist. Insbesondere Proben und alle Komponenten als potenziell
10 IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18)infektiös zu behandeln. Alle aus konjugierten Antikörper, (monoklonal,
menschlichem Blut gewonnenen Maus) gegen Schweine-Intrinsic-Faktor in
Materialien wurden auf Syphilis, einem Puffersystem mit
Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2, Konservierungsmittel. Verschlossen und
Hepatitis-B-Oberflächenantigen und gekühlt aufbewahren: Bei 2–8°C bis zum
Hepatitis-C-Antikörper untersucht und Ablaufdatum haltbar. Bei entsprechender
negativ befundet. Lagerung beträgt die empfohlene
Aufbrauchfrist nach dem Öffnen 30 Tage.
Bestimmten Komponenten wurde
LKVB1: 1 Set. LKVB5: 5 Sets.
Natriumazid (Öffnen bei 2–8°C haltbar oder aliquotiert µl/Test
6 Monate bei –20°C.
Borat/KCN-Puffer 1 000
LSUBX: Chemilumineszenz-Substrat Dithiothreitol-Lösung 20
LPWS2: Pipettenwaschlösung
LKPM: Reinigungsmodul
Wichtig: Die benötigte Arbeitslösung ist
LCHx-y: Probenträger (mit Barcodierung)
täglich frisch herzustellen. Nicht benötigte
LSCP: (Einmal) Probengefäße
Arbeitslösung ist bei 2–8°C höchstens für
LSCC: Verschlüsse für die Probenträger
24 Stunden stabil.
(optional)
CON6: Multikomponentenkontrolle in drei Probenvorbehandlung
Konzentrationen. 1. Probenvorbehandlung
Ebenfalls benötigt werden: 200 µl der Kalibratoren, Kontrollen
Transferpipetten für die Proben, und Serum- bzw. Plasmaproben in
destilliertes bzw. deionisiertes Wasser, verschließbare 12 x 75 mm
Kontrollen. Polypropylenröhrchen pipettieren.
12×75 mm Polypropylen-Röhrchen mit Proben mit zu erwartenden Werten
lose schließenden Stopfen (können über außerhalb des Messbereichs sollten
DPC bezogen werden). zusätzlich mit Vitamin B12-
Probenverdünnungsreagenz manuell
Mikropipetten: 20, 200 und 1 000 µl. Für
verdünnt werden.
die Zugabe von 1 ml Reagenz eignet sich
ein Dispenser. 2. Jeweils 1 000 µl der frisch
hergestellten Arbeitslösung zu allen
Plastik-Gefäß mit Deckel für die
Vorbereitung der Arbeitslösung. Röhrchen pipettieren und gut
mischen.
Folie oder ähnliche Vorrichtung zum
Schutz des Hämolysats vor Licht. 3. Alle Röhrchen mit lose sitzenden
Stopfen verschließen und 15 – 20
Geschlossenes, kochendes Wasserbad Minuten bei 100°C im kochenden
(100°C). Keinen Inkubator oder Heizblock Wasserbad erhitzen.
benutzen.
4. Die Röhrchen 5 Minuten in einem
Raumtemperatur-Wasserbad zum zweiten, unbeheizten Wasserbad auf
Abkühlen der Proben nach dem Kochen. Raumtemperatur abkühlen.
3,0 ml volumetrische Pipette (± 0,02 ml) 5. Mindestens 350 µl der so
für die Rekonstitution der Kalibratoren. vorbehandelten Proben in die
jeweiligen IMMULITE/IMMULITE
Herstellung der Arbeitslösung 1000-Proberöhrchen pipettieren.
Sollen aus einer Probe Vitamin B12 und Die vorbehandelten Proben (Serum oder
Folsäure bestimmt werden, muß für die Plasma) sind nur eine Stunde bei
Probenvorbehandlung der Puffer Raumtemperatur (15–28°C) oder im
verwendet werden, der in der Kühlschrank (2–8°C) haltbar. Bitte
Arbeitsanleitung des IMMULITE-Folsäure beachten Sie, dass kommerziell
Assays beschrieben ist catalog number erhältliche Kontrollen nach der
LKFO. Vorbehandlung unterschiedliche
Stabilitäten zeigen können.
Die benötigte Menge jeder Komponente
hängt von der Anzahl der
durchzuführenden Tests ab. Die Testdurchführung
benötigten Volumina sind in der Tabelle in Für eine optimale Funktion des Gerätes ist
µl pro Test aufgeführt. Diese Volumina mit unbedingt zu beachten, dass die
einer etwas höheren Anzahl als die der Wartungen, wie im IMMULITE oder
Tests multiplizieren. (Die Komponenten IMMULITE 1000-Handbuch beschrieben,
sind in ausreichender Menge vorhanden, regelmäßig durchgeführt werden.
so dass ein 20%-iger Überschuss an Das Handbuch für das IMMULITE oder
Arbeitslösung hergestellt werden kann.) IMMULITE 1000 enthält die Anweisungen
für: Vorbereitung, Geräteeinstellungen,
12 IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18)Kalibrierung, Testdurchführung und Untersuchung, der Patientenanamnese
Qualitätskontrollen. und anderen Befunden gesehen werden.
Überprüfen Sie jedes Testeinheit auf das
Vorhandensein der Polystyrol-Kugel vor Leistungsdaten
dem Einsetzen in das Gerät. Siehe Tabellen und Grafiken mit
Beachten Sie, dass zur Durchführung repräsentativen Daten für den Assay. Die
dieses Tests beide Reagenzbehälter Ergebnisse sind als pg/ml ausgedrückt.
(A und B) auf das Karussell geladen (Alle Daten wurden – sofern nicht anders
werden müssen. angegeben – aus Serumproben in
Röhrchen ohne Gelbarrieren oder
Hinter jedem Probenträger können bis zu gerinnungsfördernden Zusätze
4 Testeinheiten nachfolgen. gewonnen.)
Empfohlenes Kalibrationsintervall: Umrechnungsfaktor:
2 Wochen. pg/ml × 0,7378 → pmol/l
Proben zur Qualitätskontrolle: Messbereich: 100 – 1 200 pg/ml
Kontrollen oder Poolseren mit Vitamin B12 (74 – 885 pmol/l).
in mindestens zwei Konzentrationen
(niedrig und hoch) verwenden. Analytische Sensitivität: 50 pg/ml
(37 pmol/l).
Referenzwerte Präzision im einzelnen Testansatz
In einer Studie des Herstellers mit 245 (intraassay): Statisik aus einem einzelnen
Probanden, ohne Hinweis auf eine Testansatz mit 15 Einzelmessungen
Erkrankung und keiner Blutspende (siehe Tabelle „Intraassay Precision“).
innerhalb der letzten 12 Monate, sowie in Präzision zwischen Testansätzen
einer Studie mit 147 gesunden Probanden (interassay): Statistik aus 10
wurden folgende Werte mittels des verschiedenen Testansätzen (siehe
IMMULITE Vitamin B12 Assays ermittelt: Tabelle „Interassay Precision“).
174 – 878 pg/ml (128 – 648 pmol/l) Linearität: Proben wurden in
Diese Grenzwerte sind lediglich als verschiedenen Verdünnungen getestet.
Richtlinien aufzufassen. Jedes Labor (Repräsentative Daten entnehmen Sie
sollte seine eigenen Referenzbereiche bitte der Tabelle „Linearity“.)
etablieren. Wiederfindung: Die getesteten Proben
waren mit vier Vitamin B12-Lösungen
Grenzen der Methode (2 160, 3 640, 5 460 und 7 640 pg/ml)
1:19 versetzt. (Repräsentative Daten
Die Verwendung von EDTA-Plasma ist
entnehmen Sie bitte der Tabelle
nicht empfehlenswert.
„Recovery“.)
Heterophile Antikörper in Humanseren
Spezifität: Durch Verwendung des
können mit Immunglobulinen aus den
hochgereinigten Binders (Intrinsic Faktor)
Assaykomponenten reagieren und
ist der IMMULITE-Vitamin B12
Interferenzerscheinungen innerhalb des in
hochspezifisch für Vitamin B12. Für
vitro Immunoassays verursachen. (Clin.
Cobinamid (ein Vitamin B12-Analog)
Chem. 1998:34:27-33) Proben von
konnte keine Kreuzreaktivität bei
Patienten, die häufig mit Tier- bzw.
Konzentrationen von 1 800 000 pg/ml und
Tierserumprodukten zu tun haben, können
50 000 000 pg/ml nachgewiesen werden.
die erwähnten Interferenzen verursachen
und zu anomalen Resultaten führen. Die Bilirubin: Bilirubin hat in Konzentrationen
verwendeten Reagenzien sind so bis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf die
konzipiert, dass das Risiko einer Ergebnisse, der größer als die Impräzision
Interferenz mit den zu messenden Proben des Assays selbst ist.
minimiert ist. Dennoch können potentiell Hämolyse: Hämoglobin hat in
Interaktionen zwischen seltenen Seren Konzentrationen bis zu 381 mg/dl keinen
und den Testkomponenten auftreten. Zu Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als
diagnostischen Zwecken sollten die mit die Impräzision des Assays selbst ist.
dem Assay erhaltenen Ergebnisse immer
in Kombination mit der klinischen
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18) 13Lipämie: Triglyceride hat in
Konzentrationen bis zu 3 000 mg/dl Español
keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der
größer als die Impräzision des Assays
selbst ist.
IMMULITE Vitamina B12
Alternativer Probentyp: Die Proben
(n=22) wurden in unbehandelte und Utilidad del análisis: Para su uso en el
heparinisierte Vacutainer-Röhrchen diagnóstico in vitro con los analizadores
gefüllt. IMMULITE e IMMULITE 1000 — para la
medición cuantitativa de la vitamiba B12
(Heparin) = 0,95 (Serum) + 8,5 pg/ml en suero y plasma heparinizado, como
r = 0,987
ayuda en el diagnostico clínico y
Mittelwerte: tratamiento de la anemia.
474 pg/ml (Serum)
460 pg/ml (Heparin) Referencia: LKVB1 (100 tests),
LKVB5 (500 tests)
Da EDTA die Ergebnisse beeinflussen
würde, sollte es nicht als Antikoagulanz Código del Test: VB
verwendet werden. Código de Color: Violeta
Proteineffekt: Unterschiedliche Mengen
an humanem Serumalbumin (HSA) und Resumen y Explicación
normalem humanen IgG wurden zwei del Test
Patientenseren hinzugefügt und diese La vitamina B12 (cobalamina) y el folato
dann bestimmt. (Ergebnisse entnehmen son nutrientes esenciales para la
Sie bitte der Tabelle „Protein Effect“.) 6
hematopoyesis. La anemia
Methodenvergleich 1: Der Assay wurde megaloblastica casí siempre es
anhand von 98 Patientenproben consecuencia de la deficiencia de una de
6
(Konzentrationsbereich 90 – 1 143 pg/ml) estas vitaminas. La deficiencia de
mit dem Dualcount Solid Phase No Boil vitamina B12 también puede dar lugar a
1,2,7
(SPNB) Assay von DPC verglichen (siehe daños neurológicos severos.
„Method Comparison 1“). Durch lineare Los niveles circulantes de vitamina B12
Regression: son buenos indicadores de las reservas
(IML) = 0,99 (SPNB) + 19,1 pg/ml tisulares. Los niveles de vitamina B12 en
r = 0,982 suero o plasma determinados por un
Mittelwerte:
ensayo eficiente son normalmente bajos
385 pg/ml (IMMULITE) en situaciones de deficiencia de vitamina
1
371 pg/ml (SPNB) B12. Excepciones a esta regla pueden
ocurrir en algunas situaciones poco
Methodenvergleich 2: Der IMMULITE comunes donde los niveles de proteínas
Vitamin B12 Assay wurde weiterhin transportadoras de vitamina B12 son
anhand von 101 Patientenproben 2
anormales. Así, pueden darse niveles
(Konzentrationsbereich 102 – bajos de vitamina B12 circulante sin
1 218 pg/ml) mit einem kommerziell deficiencia de vitamina B12, cuando los
erhältlichen Radioimmunoassay (Kit A) niveles de transcobalamina I (un
verglichen (siehe „Method Comparison transportador de proteínas
2“). Durch lineare Regression: fisiológicamente inactivo) son bajos.
8
(IML) = 0,91 (Kit A) + 19,5 pg/ml
r = 0,965 Por el contrario, la deficiencia de vitamina
B12 puede ocurrir en presencia de niveles
Mittelwerte: normales o incluso elevados de vitamina
396 pg/ml (IMMULITE)
412 pg/ml (Kit A)
B12 en plasma, cuando los niveles de
transcobalamina II son bajos o en casos
donde los niveles de proteínas
Anwendungsberatung transportadores inactivas de vitamina B12
Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an son altos, como en la leucemia mieloide
5,8,11
Ihre DPC Niederlassung. crónica. (Los niveles de folato son
Das Qualitätssystem der Diagnostic Products usualmente normales o elevados en
Corporation ist nach ISO 13485:2003 registriert. situaciones de deficiencia de vitamina
B12, pero los niveles de folato de los
14 IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18)eritrocitos son normalmente bajos en esta incubación, la Vitamina B12 presente en
10
enfermedad. ) la muestra compite con el análogo de la
La deficiencia de vitamina B12 raramente fase sólida por una serie de puntos de
unión de la vitamina B12 en el factor
ocurre sólo como consecuencia de una
3,6 intrínseco purificado. (Los análogos
dieta deficiente en esta vitamina.
Normalmente, se produce como resultado endógenos de la vitamina B12 no
interfieren, porque el ligante está libre de
de un defecto en la absorción, a raíz de
proteína R). Se introduce anti factor
una gastrectomía total o parcial, o una
anemia perniciosa, a consecuencia de intrínseco porcino marcado con fosfatasa
alcalina y la Unidad de Reacción se
ausencia o deficiencia de factor
6 incuba durante otro ciclo de 30 minutos. El
intrinseco. Dado que aproximadamente
dos tercios de todos los pacientes con conjugado no ligado se elimina por un
lavado con centrifugación, después del
anemia perniciosa poseen anticuerpos
cual se añade el substrato y la Unidad de
bloqueantes del factor intrínseco (IFbAb),
Reacción se incuba durante 10 minutos
y que dichos antocuerpos raramente son
más.
encontrados en otras situaciones, las
determinaciones de IFbAb son un test de Ciclos de incubación: 2 × 30 minutos.
utilidad para el diagnostico diferencial de
4,8,10
las deficiencias de vitamina B12. (Los Recogida de la muestra
anticuerpos frente al actor intrínseco
circulante están presentes en mas de la Nota: Si la muestra va a analizarse para
mitad de todos los pacientes con anemia vitamina B12 y ácido fólico, ambos
perniciosa. Niveles elevados de proteínas incluidos, el paciente debe estar en
transportadoras pueden ocurrir, por ayunas.
18
ejemplo, en leucemia mieloide crónica.)
Aunque ni la bilirrubina ni la hemolisis
Las causas mas comunes de niveles altos tienen efectos clínicamente significativos
de vitamina B12 incluyen enfermedades en los resultados de vitamina B12, la
hepáticas, enfermedades presencia de hemoglobina en la muestra
mieloproliferativas (leucemia mieloide puede aumentar los valores de ácido
crónica) y el uso de suplementos fólico. Además, la hemolisis puede indicar
miltivitamínicos. un tratamiento indebido de la muestra
antes de su recepción en el laboratorio,
Principio del análisis por lo que los resultados deben
interpretarse con cuidado.
El IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamina
B12 es un inmunoensayo enzimático Debido a que el EDTA tiene un efecto
quimioluminiscente competitivo en fase significante en los resultados, no debería
sólida. usarse como anticoagulante.
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamina B12 Se recomienda el uso de ultracentrífuga
incluye un paso previo de para aclarar las muestras lipémicas.
desnaturalización por calor. La Vitamina La centrifugacion de las muestras de
B12 en la muestra del paciente se libera suero antes de que se forme el coagulo
de las proteínas transportadoras por puede ocasionar la presencia de fibrina.
incubación a 100°C en presencia de Para evitar resultados erroneos debidos a
ditiotritiol y cianuro potásico para inactivar la presencia de fibrina, asegurarse que se
las proteínas transportadoras de Vitamina ha formado el coagulo completamente
B12, incluso a niveles extremos, así como antes de centrifugar las muestras.
anticuerpos frente al factor intrínseco. Algunas muestras, particularmente
Después del paso de desnaturalización, la aquellas de pacientes sometidos a terapia
muestra tratada del paciente y el factor anticoagulante, pueden requerir mayor
intrínseco purificado porcino, se tiempo de coagulacion.
introducen simultáneamente en la Unidad Los tubos para recoger sangre de
de Reacción que contiene una bola de distintos fabricantes pueden producir
poliestireno recubierta con un análogo de valores diferentes, dependiendo del
la Vitamina B12 y se incuban durante material del tubo y de los aditivos,
aproximadamente 30 minutos a 37°C con incluyendo barreras de gel o barreras
agitación intermitente. Durante la
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18) 15físicas, activadores de la coagulación y/o explosivas, en las canerias de cobre y
anticoagulantes. El Vitamina B12 plomo.
IMMULITE/IMMULITE 1000 no ha sido Se ha añadido cloranfenicol, a
analizado con todos los distintos tipos de
concentraciones menores de 0,1 g/dl,
tubos. Para obtener detalles sobre los
como conservante. Se sabe que el
tipos tubos que se han analizado, cloranfenicol produce cáncer (esta
consulte la sección de Tipos de Muestras
información es necesaria comunicarla al
Alternativos.
estado de California).
Volumen de Muestra: 200 µl de la
Sustrato quimioluminiscente: evite la
muestra — suero o plasma — se contaminación y exposición a la luz
requieren para el pretratamiento. Una directa del sol. (Ver el prospecto.)
única determinación requiere 100 µl de la
muestra tratada: La copa de muestra Agua: Use agua destilada o desionizada.
debería contener al menos 250 µl más
que el volumen total de muestra requerido Materiales Suministrados
para todas las determinaciones de Los componentes representan un juego
vitamina B12 a ser realizados sobre la completo. Las etiquetas de código de
muestra. barras son necesarias para el ensayo.
Conservación: Si la muestra no se
analiza en el plazo de 8 horas, debe Unidades de análisis de Vitamina B12
conservarse a –20°C: estable durante 6–8 (LVB1)
14
semanas. Evitar la exposición excesiva a Cada unidad etiquetada con código de
la luz directa. barras contiene una bola recubierta con
Dilución de muestras: El ensayo un análogo de la vitamina B12. Estable a
IMMULITE Vitamina B12 tiene un rango 2–8°C hasta la fecha de caducidad.
de calibración de 100 a 1 200 pg/ml (de LKVB1: 100 unidades.
74 a 885 pmol/l). Todas las muestras de LKVB5: 500 unidades.
las que se esperen niveles mayores de Espere a que las bolsas de las unidades
vitamina B12 deben ser diluidas con el de análisis alcancen la temperatura
Diluyente de muestras de Vitamina B12 ambiente antes de abrirlas. Ábralas
antes del ensayo. cortando por el extremo superior, dejando
el borde del cierre de cremallera intacto.
Advertencias y precauciones Vuelva a cerrar las bolsas
Para uso diagnóstico in vitro. herméticamente para protegerlas de la
humedad.
Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desechar
de acuerdo con las normas aplicables. Viales de reactivos de Vitamina B12
La solución tamponada de borato-KCN (LVBA, LVBB)
contiene cianuro. Sea extremadamente Con código de barras. LVBA: una cuña
cuidadoso para evitar todo contacto (7,5 ml) que contiene la proteína de unión
corporal con este reactivo. a la vitamina B12 (factor intrínseco
purificado del cerdo), con conservante.
Siga las precauciones universales y LVBB: una cuña (7,5 ml) que contiene
manipule todos los componentes como si fosfatasa alcalina (de intestino de ternera)
fueran capaces de transmitir agentes conjugada a un anticuerpo monoclonal
infecciosos. Los materiales derivados de murino anti-factor intrínseco de cerdo en
sangre humana han sido analizados y son solución tampón, con conservante.
negativos para sífilis; para anticuerpos Guardar tapado y refrigerado: estable a
frente al HIV 1 y 2; para el antígeno de 2–8°C hasta la fecha de caducidad. Se
superficie de hepatitis B y para los recomienda utilizarlo antes de que pasen
anticuerpos de hepatitis C. 30 días después de su apertura, cuando
Se ha usado Azida sodica, en se guarda según lo indicado.
concentraciones menores de 0,1 g/dl, LKVB1: 1 juego. LKVB5: 5 juegos.
como conservante. Para su eliminacion,
lavar con grandes cantidades de agua
para evitar la constitucion de residuos de
azidas metalicas, potencialmente
16 IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18)Ajustadores de Vitamina B12 (LVBL, También necesarios
LVBH) Pipetas de transferencia de muestras;
Dos viales (bajo y alto), de Vitamina B12 agua destilada o desionizada; controles.
liofilizada en una matriz de proteína
Tubos de polipropileno de 12×75 mm sin
humana, con conservante. Reconstituir
anticoagulante, con tapones no
cada vial con 4,0 ml de agua destilada o ajustables— ofrecidos por DPC.
desionizada. Mezclar por agitación o
inversión suave hasta que se haya Micropipetas: 20, 200 y 1 000 µl. Para la
disuelto completamente el material adición de 1,0 ml de reactivo, se puede
liofilizado. Estable a 2–8°C durante 30 utilizar un distribuidor.
días después de la reconstitución o hasta Un contenedor de plástico con tapa (para
6 meses (alicuotados) a –20°C. preparar la solución de trabajo).
LKVB1: 1 juego. LKVB5: 2 juegos.
Papel aluminio — u otro material para
Nota: Los Ajustadores deben someterse proteger los hemolisados de la luz.
al mismo paso de desnaturalización por
calor que las muestras de los pacientes. Baño María con tapa (100°C). No usar en
un horno ni en un bloque.
Solución Tampón Borato-KCN (LBCN) Baño María a temperatura ambiente —
125 ml Solución Tampón Borato-KCN con para enfriar los tubos después de
conservante. Estable a 2–8°C durante hervirlos.
30 días después de abrise.
LKVB1: 1 vial. LKVB5: 5 viales. Pipeta volumétrica de 3,0 ml (± 0,02 ml)
para la reconstitución de ajustadores.
Precaución ! Contiene cianuro. Debe
tenerse extremo cuidado para evitar
Preparación de la Solución de
cualquier contacto corporal con este
reactivo. Trabajo
Nota: Las muestras a ser probadas para
Solución de Ditiotreitol (LDTT) Vitamina B12 y ácido fólico deben ser
3 ml Solución de Ditiotreitol. Estable a tratadas con la Solución de Trabajo
2–8°C durante 30 días después de abrise. descrita en el prospecto de IMMULITE
LKVB1: 1 vial. LKVB5: 5 viales. Acido Fólico, código LKFO.
La cantidad de cada componente
Componentes del kit que se depende del número de test que se.
suministran por separado vayan a realizar. El volumen requerido, en
microlitros por test, estan tabulados a
Diluyente de muestra de Vitamina B12 continuación. Asegurarse de multiplicar
(LVBZ) estos volúmenes por un número
Para la dilución manual de las muestras ligeramente superior al número de test
de los pacientes. Un vial que contiene que van a realizarse (Estos componentes
25 ml de un diluyente de proteína sérica son suminintrados en volúmen suficiente
humana, con conservante. Estable a para para preparar Solución de Trabajo
2–8°C durante 30 días después de abrise, un 20%.en exceso).
o hasta 6 meses (alicuotados) a –20°C.
µl/test
LSUBX: Sustrato quimioluminiscente
Solución Tampón Borato-KCN 1 000
LPWS2: Lavado de sonda
LKPM: Kit de limpieza de sonda Solución de Ditiotreitol 20
LCHx-y: Soportes de recipientes de
muestras (con códigos de barras)
LSCP: Recipientes de muestras Importante: Debe prepararse
(desechables) diariamente. De no usarse de inmediato
LSCC: Tapas para los recipientes de refrigerar a 2–8ºC durante no más de 24
muestras (opcionales) horas.
CON6: control multiconstituyente de tres
niveles.
IMMULITE/IMMULITE 1000 Vitamin B12 (PILKVB-9, 2005-11-18) 17Pretratamiento de la Muestra Muestras de Control de calidad: Use
controles o pools de muestrasro con dos
1. Pipetear 200 µl de cada ajustador,
niveles diferentes, como mínimo, de
control o muestra de paciente, en los
vitamina B12 (bajo y alto).
tubos preparados
(Diluir previamente con Diluyente de Valores esperados
Muestras de Vitamina B12, las
muestras de las que se esperen altas Se procesaron muestras de suero de 245
concentraciones.) donantes de sangre, de ambos sexos,
aparentemente sanos, que no habian
2. Añadir 1 000 µl de Solución de donado sangre en los ultimos 12 meses, y
Trabajo a todos los tubos. Vortex. 147 muestras de suero de voluntarios
3. Tapar los tubos y colocarlos en un aparentemente en buen estado de salud,
baño de agua hirviente (100°C) con el ensayo IMMULITE Vitamina B12,
durante 15–20 minutos. estableciendose un rango de normalidad
de:
4. Retirar del baño y enfriar en un baño
de agua a temperatura ambiente 174 a 878 pg/ml (128 a 648 pmol/l)
durante 5 minutos. Estos límites han de considerarse sólo
5. Pipetear al menos 350 µl de la como una guía. Cada laboratorio deberá
muestra en una Copa de Muestra establecer sus propios intervalos de
IMMULITE/IMMULITE 1000. referencia.
Las muestras tratadas, ya sean suero o
plasma, son estables a temperatura Limitación
ambiente (15–28°C) o refrigeradas a El plasma EDTA no está recomendado
2–8°C durante una hora antes de su para su uso.
análisis. Nótese que los controles Los anticuerpos heterofílicos en el suero
comerciales puede presentar una humano pueden reaccionar con las
estabilidad variable después del inmunoglobulinas de los componentes del
tratamiento. ensayo provocando interferencias con los
inmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,
Ensayo Stuart MC. Heterophilic antibodies: a
Aviso: para obtener el funcionamiento problem for all immunoassays. Clin Chem
óptimo, es importante realizar todos los 1998:34:27-33.] Las muestras de los
procedimientos del mantenimiento general pacientes que frecuentemente están
según lo definido en el manual del expuestos a animales o a productos
operador de IMMULITE o IMMULITE séricos animales pueden presentar este
1000. tipo de interferencia que potencialmente
ocasione un resultado anómalo. Estos
Ver el Manual del Operador del reactivos han sido formulados para
IMMULITE o IMMULITE 1000 para: minimizar el riesgo de interferencia, no
preparación, procesamiento, ajuste, obstante, pueden darse interacciones
procedimientos de ensayo y control de anómalas entre sueros conflictivos y los
calidad. componentes del ensayo. Con fines de
Inspeccionar visulamente cada unidad de diagnóstico, los resultados obtenidos con
rección para asegurarse de que hay una este ensayo siempre deben ser usados en
bola antes de introducirla en el Sistema. combinación con el examen clínico, la
historia médica del paciente y cualquier
Tener en cuenta que hay que colocar los
otro dato clínico relevante.
viales de reactivos A y B en el carrusel
para ejecutar este ensayo.
Características analíticas
Cada soporte de recipientes de muestras
puede acompanarse de cuatro unidades Para ver resultados representativos de las
de reaccion como maximo. cualidades del ensayo, consulte las tablas
y los gráficos. Los resultados se expresan
Intervalo de ajuste recomendado: en pg/ml. (A no ser que se indique lo
2 semanas. contrario, todos los resultados fueron
generados en muestras de suero
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