Quantum Blue fCAL extended - Buhlmann Diagnostics Corp
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Quantum Blue®
fCAL extended
Quantitative
Lateral Flow Assay
For In Vitro Diagnostic Use.
LF-CALE25 25 tests
Release date: 2021-09-10
Version A3
BÜHLMANN Laboratories AG
English page 2
Deutsch Seite 8
Baselstrasse 55
4124 Schönenbuch, Switzerland Français page 14
Tel.: +41 61 487 1212 Italiano pagina 20
Fax: +41 61 487 1234 Español página 26
info@buhlmannlabs.ch Português página 32ENGLISH REAGENTS & MATERIAL SUPPLIED
SUPPLEMENTARY
INTENDED USE Fecal extraction devices
The BÜHLMANN Quantum Blue®
fCAL extended is an in Fecal extraction devices described below are not delivered
vitro diagnostic test for the quantitative determination of with the kit and either of them has to be ordered with the
calprotectin in human stool specimens intended as an aid kit.
in the assessment of intestinal mucosal inflammation. The Extraction device
Quantity Code
assay results can be used as an aid to diagnosis in Kits
distinguishing organic, inflammatory disease of the Packages of 50, 200 or 500 B-CALEX-C50
gastrointestinal tract (inflammatory bowel disease, IBD, CALEX® Cap tubes available, filled with
B-CALEX-C200
specifically Crohn’s disease or ulcerative colitis, UC) from device 5 mL extraction buffer
Ready to use B-CALEX-C500
functional disease (irritable bowel syndrome, IBS) (ref. 1-7),
in patients with chronic abdominal pain and as an aid to 50 tubes consisting of
Smart-Prep B-CAL-RD
IBD disease monitoring (ref. 7-18). spatulas and base caps
For laboratory use only. 50 tubes consisting of tube,
EU: For professional use. ScheBo® Quick- cone & dosing tip, each filled
with 1.3 mL extraction buffer B-CAL-SO50
PrepTM
Ready to use
PRINCIPLE OF THE ASSAY
Table 2
The test is designed for the selective measurement of
calprotectin antigen by sandwich immunoassay. A
MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED
monoclonal capture antibody (mAb) highly specific for
calprotectin is coated onto the test membrane. A second • Vortex mixer for stool extraction
monoclonal detection antibody conjugated to gold colloids • Precision pipettes with disposable tips: 10-100 µL, 100-
is deposited onto the conjugate release pad and released 1000 µL and 250-2500 µL
into the reaction system after addition of the extracted and
diluted stool sample. The calprotectin / anti-calprotectin • Centrifuge
gold conjugate binds to the anti-calprotectin antibody • 5 mL polypropylene or polystyrene tubes for dilution of
coated on the test membrane (test line) and the remaining the extracts
free anti-calprotectin gold conjugate binds to the goat anti- • Timer (optional)
mouse antibody coated on the test membrane (control
• Quantum Blue® Reader available from BÜHLMANN
line). The signal intensities of the test line (T) and the
(order code: BI-POCTR-ABS)
control line (C) are measured quantitatively by the
BÜHLMANN Quantum Blue® Reader. • Soft tissues or blotting paper
REAGENTS SUPPLIED AND PREPARATION PRECAUTIONS
Reagents Quantity Code Comments Safety precautions
vacuum- • The controls of this test contain components of human
Test Cassette 25 pieces B-LFCALUS-TC sealed in a origin. Although tested and found negative for HBV
foil pouch surface antigen, HCV and HIV1/2 antibodies, the
1 bottle reagents should be handled as if capable of transmitting
Extraction Buffer B-CAL-EX Ready to use
125 mL infections and should be handled in accordance with
2 vials Good Laboratory Practices (GLP) using appropriate
Controls Low* / High* B-CALE-CONSET Ready to use
0.5 mL precautions.
RFID Chip Card 1 piece B-CALE-RCC
White plastic • Patient specimens should be handled as if capable of
card transmitting infections and should be handled in
RFID Chip Card 1 piece B-CALE-RCC720
Green plastic accordance with Good Laboratory Practice (GLP) using
card appropriate precautions.
2D Barcode
Barcode Card 1 piece B-CALE-BCC
plastic card
• Reagents: Avoid contact of reagents with the skin, eyes,
or mucous membranes. If contact does occur,
Table 1
* The controls contain lot specific amounts of native human calprotectin.
immediately wash with generous amounts of water;
Refer to the additional QC data sheet for actual concentrations. otherwise, irritation can occur.
• Reagents and chemicals have to be treated as
STORAGE AND SHELF LIFE OF REAGENTS hazardous waste according to the national biohazard
safety guideline or regulation.
All kit components are stable at 2-8 °C until the expiration
date printed on the labels.
Release date: 2021-09-10 2/44 Quantum Blue® fCAL extendedTechnical precautions Specimen storage
Stool specimens should be refrigerated at 2-8 °C and
Kit components extracted within 3 days of receipt at the laboratory. Do not
• All reagents and test samples must be equilibrated to store samples at elevated temperatures.
room temperature (18-28 °C) before starting the assay.
Extract stability
• Mix well (vortex) the reagents before use.
Fecal calprotectin extracts obtained with the CALEX® Cap
• Components must not be used after the expiry date device are stable at room temperature (23 °C) for 7 days
printed on the labels. and at 2-8 °C for up to 15 days. For longer storage, freeze
• Do not mix different lots of reagents. extracts at -20 °C. Frozen extracts are stable for a period of
• Test cassettes cannot be re-used. up to 23 months.
CALEX® Cap extracts can be stored and frozen directly
Test procedure within the CALEX® Cap device. Extracts can be subject to
• Read the instructions carefully prior to carrying out the four freeze-thaw cycles. Prior to measurement, allow frozen
assay. Assay performance will be adversely affected, if extracts to equilibrate to room temperature. For re-use / re-
reagents are incorrectly diluted, handled or stored under measurement of the extracts see step 2 under the chapter
conditions other than those as detailed in this instruction assay procedure.
for use. Fecal calprotectin extracts obtained by manual weighing
• Please note that there are two generations of readers: method, by BÜHLMANN Smart-Prep or by ScheBo® Quick-
The Quantum Blue® Reader 2nd Generation with serial Prep™ are stable at 2-8 °C for ≤ 7 days or at -20 °C for
numbers between 1000 and 3000 (QB2) and Quantum 36 months.
Blue® Reader 3rd Generation with serial numbers above
3000 (QB3G). ASSAY PROCEDURE
• The QB2 must be switched on and programmed for the The assay procedure consists of three steps:
Quantum Blue® fCAL extended assay. Load the assay
1. Extraction of stool samples
method using the RFID chip card (B-CALE-RCC or B-
CALE-RCC720) before starting the assay (see The extraction is described in the instruction for use
Quantum Blue® Reader manual). delivered with the respective extraction devices.
CALEX® Cap device: Liquid stool samples can be
• The QB3G must be switched on and programmed for
the Quantum Blue® fCAL extended assay either by pipetted directly into the CALEX® Cap device. Unscrew
using the barcode card (B-CALE-BCC) or by selecting the blue cap and pipet 10 μL of stool sample into the
from the test menu (Fast Track Mode only). For more device. Recap the CALEX® Cap device and proceed
information please refer to the Quantum Blue® Reader with vortexing step according to the extraction
manual. procedure described and illustrated in the instruction for
use delivered with the CALEX® Cap device.
• Use the RFID chip card (QB2) / barcode card (QB3G) in
order to change lot-specific test parameters. 2. Sample processing
• Patient samples that are not properly handled may • Smart-Prep or ScheBo® Quick PrepTM: Let the stool
cause inaccurate results. extract settle for 10 minutes after extraction. Dilute the
supernatant 1:10 with extraction buffer (e.g. 50 µL stool
• In order to receive reliable and quantitative results it is
extract and 450 µL extraction buffer) and mix well. Let
important to homogenize the stool sample entirely in the
the samples equilibrate for at least 5 minutes at 18-
extraction device.
28 °C prior to proceeding to the next step (step no. 3).
• With BÜHLMANN Smart-Prep and ScheBo® Quick-
• CALEX® Cap device: After extraction, let the stool
PrepTM, it is important to centrifuge the extracts before
extract settle for 10 minutes with the white head of the
storage. Centrifuge the tubes for 5 minutes at 3000 x g.
device down. Unscrew the blue cap. The supernatant
After centrifugation the supernatant must be transferred
can be used without further dilution in the lateral flow
into a fresh storage tube.
assay.
SPECIMEN COLLECTION, STORAGE, STABILITY 3. Lateral flow assay procedure and readout
For the extraction procedure, less than 1 g of native stool QB2
specimen is required. Collect stool specimen into plain Two alternative methods can be loaded from the respective
tubes. RFID chip card: B-CALE-RCC720 (with internal timer) or B-
Important: The specimen must be collected without any CALE-RCC (without internal timer). Select one of the RFID
chemical or biological additives. chip cards before starting the experiments. Load the test
method from the RFID chip card on the Quantum Blue®
Specimen transport Reader.
Stool specimens should be received for processing by the
laboratory within 3 days of collection. The specimens may
be transported at room temperature or refrigerated.
Release date: 2021-09-10 3/44 Quantum Blue® fCAL extended3.2. Method without internal timer
QB2: Use the white RFID chip card B-CALE-RCC
QB3G (Fast Track Mode): when prompted by the QB3G to
QB3G skip the incubation time, select “YES”
Two different modes of operation are available from QB3G (Fail Safe Mode): option not available
BÜHLMANN to measure samples with the QB3G: Fast • Unpack the test cassette. Add 60 µL of stool extract
Track Mode or Fail Safe Mode. Before starting the assay, onto the sample loading port of the test cassette.
please inform yourself in which operation mode your reader
• Incubate for 12 minutes +/- 1 minute (set a timer
is working.
manually).
The test method can be loaded from the barcode card
(Fast Track and Fail Safe Mode) or, if previously used, • Load the test cassette onto the test cassette holder of
selected from the test menu (Fast Track Mode only). the reader.
Measurements can be performed with or without an internal • Scan the test cassette with the Quantum Blue® Reader
timer in the Fast Track Mode. Measurements in the Fail immediately by pressing the start button on the QB2 or
Safe Mode can be performed with internal timer only. the “Start Measurement” option on the QB3G.
Follow the instructions provided on the screen of the • For low / high controls: Repeat step 3.2 with 60 µL of
QB3G. You may also refer to the QB3G Quick Guides for controls instead of stool extract.
the Fast Track and Fail Safe Mode.
Remark: Please refer to your Quantum Blue® Reader
manual to learn about the basic functions and how to
initialize and operate the Quantum Blue® Readers,
especially how to select test methods and how to load lot-
specific parameters from the RFID chip card (QB2) /
barcode card (QB3G) on the Quantum Blue® Reader.
Ensure the correct insertion of the test cassette into the
3.1. Method with internal timer
Quantum Blue® Reader, with the read-out window first
QB2: use the green RFID chip card B-CALE-RCC720 (figure 1D).
QB3G (Fast Track Mode): when prompted by the QB3G to
skip the incubation time, select “NO” QUALITY CONTROL
QB3G (Fail Safe Mode): default setting • If the performance of the assay does not correlate with
• Unpack the test cassette. Add 60 µL of stool extract the established limits and repetition excludes errors in
onto the sample loading port of the test cassette. technique, check the following issues: i) pipetting,
temperature controlling and timing ii) expiration dates of
• Load the test cassette onto the test cassette holder of
reagents and iii) storage and incubation conditions.
the reader.
• The result of the self-test of the Quantum Blue® Reader
• Close the test cassette holder and start the
performed at startup has to be valid.
measurement by pressing the start button on the QB2
or the “Start Measurement” option on the QB3G.
VALIDATION OF RESULTS
• The scan starts automatically after 12 minutes (720
seconds). • For a valid test result, the control line (C) must be visible
• For low / high controls: Repeat step 3.1 with 60 µL in any case (see figures 1A and 1B). It is used as
controls instead of stool extract. functional test control only and cannot be used for the
Release date: 2021-09-10 4/44 Quantum Blue® fCAL extendedinterpretation of the test line (T). If the test line (T) is not • Patients who are taking NSAIDs regularly may have
detectable after 12 minutes of incubation time (figure elevated fecal calprotectin levels.
1A), the concentration of calprotectin present in the • Results may not be clinically applicable to children less
stool sample is below the detection limit. If a test line (T) than 4 years of age who have mildly increased fecal
is detectable after 12 minutes of incubation time (figure calprotectin levels (ref. 21-24).
1B), the calprotectin concentration present in the stool
sample is calculated by the Quantum Blue® Reader.
INTERPRETATION OF RESULTS
• If only the test line (T) is detectable after 12 minutes of
incubation time (figure 1C), the test result is invalid and I. Distinguishing organic disease from functional
the assay has to be repeated using another test gastrointestinal disease
cassette. The determination of fecal calprotectin levels can be used
• If neither the control line (C) nor the test line (T) are as a reliable and simple aid in distinguishing organic from
detectable after 12 minutes of incubation time (figure functional gastrointestinal diseases (ref. 1-7).
1D), the test result is invalid and the assay has to be The result categories are based on data from clinical
repeated using another test cassette. studies performed by BÜHLMANN and are BÜHLMANN’s
• As the Quantum Blue® Reader allows a quantitative recommendations. All test results should be interpreted in
evaluation of the test (T) and control (C) lines, an conjunction with information available from the patient’s
additional validity check of the control line (C) is clinical symptoms, medical history, and other clinical and
undertaken. If the signal intensity of the control line (C) laboratory findings.
is below a threshold after 12 minutes of incubation time, Clinical thresholds
the test result is also invalid and the assay has to be The following data were established with the BÜHLMANN
repeated using another test cassette. fCAL® ELISA (order code: EK-CAL).
Results from 58 clinical samples from patients diagnosed
STANDARDIZATION with IBS and 131 clinical samples from patients diagnosed
• The Quantum Blue® fCAL extended is standardized with with IBD, from an international clinical study, were analyzed
the BÜHLMANN fCAL® ELISA (order code: EK-CAL). to obtain the values described in table 3.
• The Quantum Blue® Reader uses a lot-specific standard
curve to calculate the calprotectin concentration. The Calprotectin
assay range is between 30 and 1000 µg/g. Interpretation Follow-up
concentration
• To receive quantitative results for calprotectin < 80 µg/g Normal None
concentration between 850-1800 µg/g, high samples
Follow-up within 4 – 6
reading above 850 µg/g can be re-tested with the 80 - 160 µg/g Gray-zone/Borderline
weeks
BÜHLMANN Quantum Blue® high range test (order
> 160 µg/g Elevated Repeat as needed
code: LF-CHR25).
Table 3
LIMITATIONS Calprotectin values below 80 μg/g
Fecal calprotectin values 160 µg/g are indicative of
may be prone to a high dose hook effect, that can result neutrophil infiltrate in the gastrointestinal tract; therefore,
in values below the expected 850 μg/g upper limit of the this may signal the presence of active inflammatory
linear range. It is advised to give particular attention to disease. Appropriate further investigative procedures by
results above 300 μg/g when accompanied by strong specialists are suggested to achieve an overall clinical
symptoms, which could indicate acute inflammation. In diagnosis.
this case retesting of a patient’s stool sample by a Clinical evaluation
laboratory in timely manner is recommended for
The ability of the BÜHLMANN fCAL® ELISA to discriminate
confirmation.
between patients with IBD and other non-inflammatory GI
disorders, including IBS, was tested in a clinical study with
Release date: 2021-09-10 5/44 Quantum Blue® fCAL extendeda total of 337 adult and pediatric patients. One hundred and PERFORMANCE CHARACTERISTICS
thirty five (135) patients had a final diagnosis of IBD
(Crohn’s disease, ulcerative colitis or indeterminate colitis), The following performance characteristics have been
130 patients suffered from IBS and 72 patients presented established with the Quantum Blue® Reader 2nd Generation
with abdominal pain and/or diarrhea, or other GI-related and were verified on the Quantum Blue® Reader 3rd
non-inflammatory conditions (refer to table 4). Final Generation.
diagnosis was supported by endoscopic as well as other Indicated performance characteristics apply for both
clinical findings. Reader generations.
Method comparison
A clinical sensitivity of 93.3% at 80 µg/g and a clinical
specificity of 83.7% at 160 µg/g, can be reached in the Bias at clinical decision points:
differentiation between IBD and GI-related non- 80 μg/g: 4.2% (95% CI: -2.0 - 19.3%)
inflammatory conditions, including IBS. ROC curve analysis 100 μg/g: 2.1% (95% CI: -2.7 - 14%)
resulted in an AUC of 0.923 (refer to table 5).
160 µg/g: -1.1% (95% CI: -4.1 - 6.6%)
A clinical sensitivity of 93.3% at 80 µg/g and a clinical
300 μg/g: -3.6% (95% CI: -7.0 - 2.3%)
specificity of 85.4% at 160 µg/g, can be reached in the
differentiation between IBD and IBS. ROC curve analysis The method comparison study was performed according to
resulted in an AUC of 0.933 (refer to table 6). the CLSI guideline EP09-A3. One hundred and eighty six
(186) extracted clinical stool samples were measured
The optimal cut-off combination for these patient pools
according to the instruction for use with the Quantum Blue®
could be defined by ROC analysis at 80 µg/g and 160 µg/g
fCAL extended test and with the BÜHMANN fCAL® ELISA.
calprotectin, which is slightly more stringent than a
Measurements were performed over three days using three
combination of a more sensitive lower cut-off of 50 µg/g
Quantum Blue® fCAL extended test cassette lots (figure 2).
with lower performance in specificity, and an upper cut-off
of 200 µg/g with slightly lower sensitivity (table 7 and 8). Recovery: 102%-121%
Six stool specimen extracts were spiked with 150 μg/g
II. IBD monitoring
calprotectin in calibrator material of human serum origin.
Clinical thresholds and evaluation The baseline extract was spiked with the corresponding
The determination of fecal calprotectin is also a reliable and amount of extraction buffer. Baseline and spiked samples
simple way to assist the monitoring of IBD patients were measured in eight replicates. One test cassette lot
(ref. 7-18). was used. The results are summarized in table 11.
Correlation of calprotectin levels and the inflammatory
status of patients’ intestinal mucosa, according to Repeatability: 15.3-19.1% CV
endoscopic evaluations, was determined in three Within-laboratory precision: 18.0-23.0% CV
independent studies using BÜHLMANN calprotectin tests Repeatability and within-laboratory precision were
(table 9). The diagnostic value of calprotectin in predicting determined according to CLSI guideline EP05-A2. Four
clinical remission and relapse, according to patient`s extracted stool samples, including extracts with calprotectin
symptoms, clinical activity indices, unplanned need for levels close to clinical decision points, were measured over
therapy escalation, hospitalization or emergency was ten days, in two independent runs each day, with two
determined in three studies using BÜHLMANN calprotectin replicates per run. A single reagent lot was used (table 12).
tests (table 10).
The result categories shown are recommendations and Inter-lot precision: 16.5-20.6% CV
their establishment is based on condensed knowledge of Inter-lot precision was determined according to CLSI
published cut-offs and clinical performance studies. It is guideline EP05-A2. Four extracted stool samples, including
advised that healthcare practitioners establish individual extracts with calprotectin levels close to clinical decision
patient thresholds by determining the patient’s baseline points, were measured using three different reagent lots.
calprotectin level during disease remission. The measurements were performed over five days, in a
single run each day, with two replicates per run (table 13).
Calprotectin values below 100 µg/g:
Fecal calprotectin levels below 100 µg/g can reliably Limit of Blank (LoB):
indicate patients, with low risk of clinical relapse, in QB2: 6.7 µg/g calprotectin.
endoscopic remission for whom invasive endoscopic QB3G: 12.5 µg/g calprotectin.
procedures can be avoided (ref. 7-18). The LoB was established according to CLSI guideline
Calprotectin values between 100 and 300 µg/g: EP17-A using extraction buffer to obtain 60 blank values.
Fecal calprotectin levels between 100-300 µg/g may The study was performed with two different test cassette
indicate the necessity of tighter control in the following lots.
period to assess disease development tendencies. Limit of Detection (LoD):
Calprotectin values above 300 µg/g: QB2: 18 µg/g calprotectin.
Fecal calprotectin levels above 300 µg/g should be QB3G: 20.2 µg/g calprotectin
repeated and, if raised levels are confirmed, prompt further The LoD was established according to CLSI guideline
investigative procedures (ref. 7-18). EP17-A. Two extracted stool samples with calprotectin
concentrations of 58 and 62 μg/g were diluted in extraction
buffer to obtain a total of six samples with concentrations
ranging from 1 x LoB (6.3 µg/g) to 4 x LoB (25.1 µg/g). The
Release date: 2021-09-10 6/44 Quantum Blue® fCAL extendedsamples were measured in ten replicates to obtain 60 values. The study was performed with two different test cassette lots. Limit of Quantification (LoQ): Lower LoQ: ≤30 (28.2) µg/g calprotectin. Upper LoQ: ≥1000 (1002) µg/g calprotectin. The LoQ was established according to CLSI guideline EP17-A. To determine the lower LoQ, four extracted stool samples with calprotectin concentrations ranging from 19.1 to 37.3 µg/g were measured in ten replicates to produce 40 values (table 14). To determine the upper LoQ, four extracted stool samples with calprotectin concentrations ranging from 628 to 1001.7 µg/g were measured in ten replicates to produce 40 values (table 15). The study was performed with two different test cassette lots. Reference calprotectin values of extracted stool samples were determined with the BÜHLMANN fCAL® ELISA. The relative total error was calculated using the RMS model from estimates of precision and bias to the reference values, for each sample. The LoQ was defined as the lowest and highest sample concentration, for the lower LoQ and upper LoQ, respectively, which met the acceptance criterion of 30% relative total error. Linearity: 30-850 μg/g The linear range of the Quantum Blue® fCAL extended assay was determined according to CLSI guideline EP06- A. Two extracted stool samples with low and high calprotectin concentrations were blended to obtain a total of 14 concentration levels covering and exceeding the expected measuring range. The blends were assayed in ten replicates on two test cassette lots. Mean calprotectin concentration values of each blend were plotted against the dilution factor used to obtain the blend. Linear as well as second and third order polynomial fitting was applied. Where coefficients of the second and third order polynomial fits were determined to be significant, the linear range was defined as the interval of calprotectin concentration in which deviation from the linear fit did not exceed 20% relative concentration value or 20 μg/g (figure 3). High dose hook effect No high dose hook effect was observed for calprotectin concentrations up to 1500 µg/g. Decrease in mean signal below the 850 μg/g upper linear range limit was estimated for calprotectin concentrations above 4000 μg/g. No value below the highest clinical decision point of 300 µg/g was observed for any of the single replicate results for all high samples tested. Seven to eight extracted stool samples with calprotectin concentrations ranging from 1361 µg/g to 13`817 µg/g were measured in five replicates on three different test cassette lots. Release date: 2021-09-10 7/44 Quantum Blue® fCAL extended
DEUTSCH REAGENZIEN & MATERIAL ZUSÄTZLICH
ERHÄLTLICH
ANWENDUNGSZWECK Stuhlextraktionprodukte
Der BÜHLMANN Quantum Blue®
fCAL extended ist ein in Extraktionsprodukte zur Stuhlextraktion werden nicht mit
vitro-Diagnosetest für die quantitative Bestimmung von diesem Kit mitgeliefert und müssen zusätzlich zum Kit
Calprotectin in humanen Stuhlproben, der als Hilfsmittel bei bestellt werden.
der Beurteilung von Darmschleimhautentzündung dient. Extraktions-
Menge Art.-Nr.
Die Testergebnisse dienen bei der Diagnose als Hilfsmittel produkt Kits
zur Unterscheidung zwischen organischen, entzündlichen Packungen mit 50, 200 oder
Erkrankung des Magen-Darm-Traktes (entzündliche 500 Röhrchen erhältlich, B-CALEX-C50
Darmerkrankungen (CED), speziell Morbus Crohn oder CALEX® Cap gefüllt mit 5 mL B-CALEX-C200
Extraktionspuffer B-CALEX-C500
Colitis ulcerosa (UC)) und funktionellen Erkrankungen
Gebrauchsfertig
(Reizdarmsyndrom (RDS)) (Ref. 1-7) bei Patienten mit
chronischen Bauchschmerzen und als Hilfsmittel bei der 50 Röhrchen bestehend aus
Smart-Prep B-CAL-RD
Spatel und Böden
Überwachung der CED (Ref. 7-18).
Für den Laborgebrauch. 50 Röhrchen bestehend aus
Röhrchen, Konus und
Europa: Für den professionellen Gebrauch.
ScheBo® Quick- Dosierspitze,
B-CAL-SO50
Prep™ gefüllt mit 1.3 mL
PRINZIP DER METHODE Extraktionspuffer
Gebrauchsfertig
Das Testprinzip beruht auf der selektiven Messung von Tabelle 2
Calprotectin mittels eines Sandwich Immunoassays. Ein
monoklonaler Fangantikörper (mAk), der hoch spezifisch
NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTENE
für Calprotectin ist, wird auf eine Testmembran gebunden.
ERFORDERLICHE MATERIALIEN
Ein zweiter monoklonaler Nachweisantikörper, welcher mit
Goldkolloiden konjugiert ist, wird auf dem „Conjugate • Vortex Mischer für die Stuhlextraktion
Release Pad“ aufgebracht. Nach der Zugabe der • Präzisionspipetten mit Einwegspitzen: 10-100 µL,
extrahierten und verdünnten Stuhlprobe wird er in das 100-1000 µL und 250-2500 µL
Reaktions-System freigesetzt. Der Calprotectin / Anti-
Calprotectin-Goldkonjugat Komplex bindet an den auf der • Zentrifuge
Membran gebundenen Anti-Calprotectin Antikörper • 5 mL Polypropylen oder Polystyrol Einwegröhrchen zur
(Testlinie; Testbande). Das verbleibende nicht gebundene Durchführung von Extraktverdünnung
Anti-Calprotectin-Goldkonjugat wird von einem Ziege-Anti- • Laborwecker (optional)
Maus Antikörper gebunden, welcher ebenfalls auf die
Membran gebunden wurde (Kontrollinie; Kontrollbande). • Quantum Blue® Reader bei BÜHLMANN erhältlich
(Art.-Nr.: BI-POCTR-ABS)
Die Signalintensität der Testbande (T) und der
Kontrollbande (C) wird durch den BÜHLMANN Quantum • Papiertücher und Fliesspapier
Blue® Reader quantifiziert.
VORSICHTSMASSNAHMEN
GELIEFERTE REAGENZIEN UND VORBEREITUNG Sicherheitsmassnahmen
Reagenz Menge Art.-Nr. Kommentar • Die Kontrollen enthalten Bestandteile humanen
Vakuumdicht In Ursprungs. Obwohl sie negativ in Tests für HBV
B-LFCALUS-
Testkassette 25 Stück
TC
einem Oberflächenantigen, HCV und HIV1/2 Antikörper waren,
Folienbeutel sollten sie gemäss Guter Laborpraxis (GLP) als
Extraktionspuffer
1 Flasche
B-CAL-EX Gebrauchsfertig
potentiell infektiös behandelt werden und die
125 mL entsprechenden Sicherheitsvorkehrungen getroffen
Kontrollen 2 Fläschchen B-CALE- werden.
Gebrauchsfertig
tief* / hoch* 0,5 mL CONSET
• Alle Patientenproben sollten gemäss Guter Laborpraxis
RFID Chipkarte 1 Stück B-CALE-RCC
Weisse (GLP) als potentiell infektiös behandelt werden und die
Plastikkarte
entsprechenden Sicherheits-vorkehrungen sollten
B-CALE- Grüne getroffen werden.
RFID Chipkarte 1 Stück
RCC720 Plastikkarte
• Reagenzien: Kontakt der Reagenzien mit der Haut, den
2D-Barcode-
Barcodekarte 1 Stück B-CALE-BCC
plastikkarte Augen oder den Schleimhäuten vermeiden. Im Falle
eines Kontaktes sofort mit reichlich Wasser spülen,
Tabelle 1
ansonsten kann eine Reizung auftreten.
* Die Kontrollen enthalten lotspezifische Konzentrationen von nativem,
humanem Calprotectin. Die genauen Konzentrationen werden auf dem • Die Reagenzien und Chemikalien müssen gemäss den
QC Datenblatt angegeben. nationalen Richtlinien und Bestimmungen als
gefährlicher Abfall behandelt werden.
LAGERUNG UND HALTBARKEIT DER REAGENZIEN
Sämtliche Kitkomponenten sind bei 2-8 °C bis zum
angegebenen Ablaufdatum haltbar.
Release date: 2021-09-10 8/44 Quantum Blue® fCAL extendedTechnische Vorsichtsmassnahmen Transport der Proben
Kitkomponenten Die Stuhlproben sollten innerhalb von 3 Tagen nach der
• Sämtliche Reagenzien und Proben müssen vor der Gewinnung zur Bearbeitung im Labor eingehen. Die
Testdurchführung auf Raumtemperatur (18-28 °C) Stuhlproben können bei Raumtemperatur oder gekühlt
gebracht werden. versendet werden.
• Die Reagenzien vor dem Gebrauch gut mischen Lagerung der Proben
(Vortex). Die Stuhlproben sollten im Kühlschrank bei 2-8 °C
• Die Reagenzien dürfen nach Ablauf des Verfallsdatums aufbewahrt und innerhalb von 3 Tagen nach Eingang im
nicht mehr verwendet werden. Labor extrahiert werden. Die Proben nicht bei erhöhten
Temperaturen lagern.
• Mischen Sie nicht die Reagenzien verschiedener Kit
Lots. Stabilität der Extrakte
• Die Testkassetten dürfen nicht wiederverwendet Fäkales Calprotectin in Extrakten, die mit dem CALEX®
werden. Cap gewonnen wurden, ist bei Raumtemperatur (23 °C)
7 Tage und bei 2-8 °C bis zu 15 Tage stabil. Bei längerer
Testablauf Lagerung, die Extrakte bei -20 °C einfrieren. Gefrorene
• Lesen Sie die Testanleitung vor der Testdurchführung Extrakte sind für einen Zeitraum von bis zu 23 Monaten
sorgfältig durch. Die Leistungsdaten können negativ stabil.
beeinflusst werden, wenn Reagenzien nicht korrekt CALEX® Cap Extrakte können direkt im CALEX® Cap
verdünnt, behandelt oder unter Bedingungen gelagert gelagert und gefroren werden. Die Extrakte können vier
werden, die von der beschriebenen Arbeitsanleitung Einfrier/ Auftau-Zyklen ausgesetzt werden. Vor der
abweichen. Messung die gefrorenen Extrakte auf Raumtemperatur
• Bitte beachten Sie, dass es zwei Generationen von äquilibrieren lassen. Zur Weiterverwendung der Extrakte
Readern gibt: Den Quantum Blue® Reader der siehe Schritt 2 unter dem Kapitel Testdurchführung.
2. Generation mit Seriennummern zwischen 1000 und Calprotectin-Stuhlextrakte, die mit der manuellen
3000 (QB2) und den Quantum Blue® Reader der Wiegemethoden, wie BÜHLMANN Smart-Prep oder
3. Generation mit Seriennummern über 3000 (QB3G). ScheBo® Quick-Prep™, gewonnen wurden, sind bei 2-8 °C
für ≤7 Tage oder bei –20 °C für 36 Monate stabil.
• Der QB2 muss vor Beginn des Tests eingeschaltet und
für den Quantum Blue® fCAL extended Test
programmiert werden. Laden Sie die Testmethode TESTDURCHFÜHRUNG
mithilfe der RFID Chipkarte (B-CALE-RCC oder B- Der Arbeitsablauf gliedert sich in drei Schritte:
CALE-RCC720) bevor Sie den Test starten (siehe
Handbuch des Quantum Blue® Readers). 1. Extraktion der Stuhlproben:
• Der QB3G muss eingeschaltet und für den Quantum Die Extraktion ist in der Arbeitsanleitung des gewählten
Blue® fCAL extended Test programmiert werden, indem Extraktionsröhrchens beschrieben.
entweder die Barcodekarte (B-CALE-BCC) verwendet
CALEX® Cap: Flüssige Stuhlproben können direkt in
oder aus dem Testmenü (nur Fast Track Mode)
das CALEX® Cap pipettiert werden. Die blaue Kappe
ausgewählt wird. Weitere Informationen sind im
abschrauben und 10 µL der Stuhlprobe in das Röhrchen
Handbuch des Quantum Blue® Readers aufgeführt.
pipettieren. Die Kappe des CALEX® Cap wieder
• Benutzen Sie die RFID Chipkarte (QB2) / Barcodekarte aufschrauben und mit dem Vortex-Schritt gemäss dem
(QB3G), um die testspezifischen Parameter zu ändern. Extraktionsverfahren, das in der mit dem CALEX® Cap
• Unsachgemässe Handhabung der Patientenproben mitgelieferten Gebrauchs-anweisung beschrieben und
können zu unbrauchbaren Resultaten führen. abgebildet ist, fortfahren.
• Um verlässliche, quantitative Resultate zu erhalten, ist 2. Verarbeitung des Extraktes:
es wichtig, dass die im Extraktionsröhrchen enthaltene • Smart-Prep oder ScheBo® Quick PrepTM: Die Extrakte
Stuhlprobe vollständig homogenisiert wird. nach der Extraktion 10 Minuten ruhen lassen. Den
• Es ist wichtig, dass die Extrakte im Smart-Prep oder Überstand mit Extraktionspuffer 1:10 verdünnen (z.B.
ScheBo® Quick-Prep™ vor der Lagerung für 5 Min. bei 50 µL Extrakt + 450 µL Extraktionspuffer). Nach der
3000 x g zentrifugiert werden. Nach der Zentrifugation Verdünnung gut mischen und die Proben vor Gebrauch
muss der Überstand in ein frisches Röhrchen für mindestens 5 Minuten bei 18-28 °C stehen lassen,
transferiert werden. bevor mit dem nächsten Schritt fortgefahren wird
(Schritt Nr. 3).
PROBENENTNAHME, LAGERUNG, STABILITÄT • CALEX® Cap: Die Extrakte nach der Extraktion 10
Für das Extraktionsverfahren werden weniger als 1 g native Minuten mit dem weissen Verschluss nach unten ruhen
Stuhlprobe benötigt. Die Stuhlproben in Röhrchen ohne lassen. Öffnen Sie den blauen Verschluss. Der
Zusatzstoffe füllen. Überstand kann dann ohne weitere Verdünnung in
dem Lateral Flow Testablauf verwendet werden.
Wichtiger Hinweis: Den Proben dürfen keine chemischen
oder biologische Zusatzstoffe beigefügt werden.
Release date: 2021-09-10 9/44 Quantum Blue® fCAL extended3. Lateral Flow Testablauf und Quantifizierung QB3G (Fail Safe Mode): Standardeinstellung
• Packen Sie die Testkassette aus. Tragen sie 60 μL
QB2
Extrakt auf die runde Probenauftragsstelle der Kassette
Es können zwei alternative Methoden von der jeweiligen auf.
RFID-Chipkarte geladen werden: B-CALE-RCC720 (mit
internem Zeitmesser) oder B-CALE-RCC (ohne internen • Testkassette auf den Kassettenhalter des Quantum
Zeitmesser). Wählen Sie eine der RFID-Chipkarten vor Blue® Readers laden.
dem Start der Experimente. Laden Sie die testspezifischen • Den Testkassettenhalter schliessen und die Messung
Parameter von der RFID Chipkarte auf den Quantum Blue® durch Drücken der Starttaste am QB2 oder der Option
Reader. „Messung starten“ am QB3G starten.
• Der Lesevorgang startet automatisch nach 12 Minuten
(720 Sek.).
• Für die Kontrollen Tief / Hoch: Wiederholen Sie den
Schritt 3.1 mit 60 μL Kontrollen anstelle des verdünnten
Stuhlextrakts.
QB3G
Zur Probenmessung mit dem QB3G sind zwei
verschiedene Betriebsmodi von BÜHLMANN verfügbar: 3.2 Methode ohne internen Zeitmesser
Fast Track Mode oder Fail Safe Mode. Bitte informieren Sie QB2: Verwenden Sie die weisse RFID Chipkarte B-CALE-
sich vor Beginn des Tests darüber, in welchem RCC
Betriebsmodus Ihr Lesegerät arbeitet. QB3G (Fast Track Mode): Bei Aufforderung des QB3G die
Die Testmethode kann von der Barcodekarte geladen (Fast Inkubationszeit zu überspringen, „JA“ auswählen.
Track und Fail Safe Mode) bzw., falls zuvor verwendet, aus QB3G (Fail Safe Mode): Option nicht verfügbar
dem Testmenü ausgewählt werden (nur Fast Track Mode).
Im Fast Track Mode können die Messungen mit oder ohne • Packen Sie die Testkassette aus. Tragen sie 60 μL
internen Zeitmesser durchgeführt werden. Im Fail Safe Extrakt auf die runde Probenauftragsstelle der Kassette
Mode können die Messungen nur mit einem internen auf.
Zeitmesser durchgeführt werden. • Die Testkassette für 12 +/-1 Minuten inkubieren
Folgen Sie den Anweisungen, die auf der Anzeige des (einen Wecker manuell einstellen).
QB3G angezeigt sind. Weitere Informationen zum Fast • Testkassette auf den Kassettenhalter des Quantum
Track und Fail Safe Mode finden Sie in den Blue® laden
Kurzanleitungen des QB3G.
• Die Testkassette sofort mit dem Quantum Blue® Reader
durch Drücken der Starttaste am QB2 oder der Option
„Messung starten“ am QB3G scannen.
• Für die Kontrollen Tief / Hoch: Wiederholen Sie den
Schritt 3.2 mit 60 μL Kontrollen anstelle des verdünnten
Stuhlextrakts.
3.1 Methode mit internem Zeitmesser Anmerkung: Informationen zu den Grundfunktionen sowie
QB2: Verwenden Sie die grüne RFID Chipkarte B-CALE- der Initialisierung und dem Betrieb der Quantum Blue®
RCC720 Reader, insbesondere zur Auswahl der Testmethoden und
zum Laden chargenspezifischer Parameter von der RFID-
QB3G (Fast Track Mode): Bei Aufforderung des QB3G die
Chipkarte (QB2) / Barcodekarte (QB3G) am Quantum
Inkubationszeit zu überspringen, „NEIN“ auswählen.
Blue® Reader sind im Handbuch des Quantum Blue®
Release date: 2021-09-10 10/44 Quantum Blue® fCAL extendedReaders enthalten. Die Testkassette muss mit der richtigen EINSCHRÄNKUNGEN
Orientierung (mit dem Ablesefenster zuerst) in den
Quantum Blue® Reader eingelegt werden (Abbildung 1D). • Die mit dem Quantum Blue® fCAL extended Kit
bereitgestellten Reagenzien sind nur für die
Bestimmung der Calprotectinkonzentrationen in
QUALITÄTSKONTROLLE
humanen Stuhlproben vorgesehen.
• Falls die Ergebnisse des Tests nicht innerhalb der • Fäkale Calprotectinwerte sind als Hilfe bei der Diagnose
erwarteten Bereiche liegen und wiederholte Messungen zur Unterscheidung einer organischen Erkrankung von
einen Durchführungsfehler ausschliessen, sind folgende einer funktionellen Erkrankung und zur IBD-
Bedingungen zu überprüfen: i) Pipetten, Temperatur Überwachung vorgesehen. Die Interpretation der
und Zeitmessung, ii) Verfallsdaten der Reagenzien, iii) Resultate sollte stets in Kombination mit anderen
Lagerung- und Inkubationsbedingungen. klinischen Ergebnissen und Laborergebnissen erfolgen.
• Der Selbsttest, der beim Einschalten des Quantum • Um bei der IBD-Überwachung die beste diagnostische
Blue® Readers durchgeführt wird, muss gültig sein. Genauigkeit zu erzielen, einen klinischen Rückfall
vorherzusehen, wurde empfohlen mehrere Messungen
VALIDIERUNG DER RESULTATE des Stuhlcalprotectins in bis zu 4 Wochen Intervallen
durchzuführen (Ref. 19-20).
• Damit das Testresultat als gültig bewertet wird, muss
die Kontrollbande (C) klar ersichtlich sein (siehe • In seltenen Fällen, wenn die Calprotectin-
Abbildungen 1A und 1B). Diese wird nur als konzentrationen extrem hoch sind (über 4000 μg/g, d.h.
Funktionskontrolle verwendet und kann nicht zur bei akuter UC), könnte das Testsystem empfindlich für
Interpretation der Testbande (T) benutzt werden. Falls einen High-Dose-Hook-Effekt sein, was Werte unterhalb
die Testbande (T) nach 12 Minuten Inkubation nicht der erwarteten Obergrenze des linearen Bereichs von
nachweisbar ist (Abbildung 1A), bedeutet dies, dass die 850 μg/g ergeben könnte. Es wird geraten besondere
Calprotectinkonzentration im Stuhl nicht nachweisbar Aufmerksamkeit auf Resultate oberhalb von 300 μg/g zu
ist. Falls die Testbande (T) nach der Inkubation legen, wenn sie mit starken Symptomen einhergehen,
nachweisbar ist, wird die Calprotectinkonzentration in was eine akute Entzündung anzeigen könnte. In diesem
der Stuhlprobe durch den Quantum Blue® Reader Falle wird für die Bestätigung eine zeitnahe erneute
berechnet. Messung der Patientenstuhlprobe empfohlen.
• Falls nach der Inkubation von 12 Minuten nur die • Patienten, die regelmässig NSAID einnehmen, könnten
Testbande (T) sichtbar ist (Abbildung 1C), ist das erhöhte fäkale Calprotectinkonzentrationen aufweisen.
Resultat ungültig und der Test muss mit einer neuen • Die Ergebnisse sind unter Umständen nicht klinisch
Testkassette wiederholt werden. anwendbar auf Kinder unter 4 Jahren, die leicht erhöhte
• Falls weder die Kontrollbande (C) noch die Testbande Calprotectinspiegel im Stuhl aufweisen (Ref. 21-24).
(T) nach der Inkubation nach 12 Minuten nicht
nachweisbar sind (Abbildung 1D), ist das Resultat INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
ungültig und der Test muss mit einer neuen
I. Unterscheiden einer organischen Erkrankung von
Testkassette wiederholt werden.
einer funktionellen gastrointestinalen Erkrankung
• Da der Quantum Blue® Reader eine quantitative
Bestimmung der Test (T) und der Kontrollbande (C) Die Bestimmung des Calprotectinspiegels in Stuhlproben
erlaubt, wird eine zusätzliche Validitätsprüfung kann als zuverlässige und einfache Hilfe bei der
durchgeführt. Falls die Signalintensität der Unterscheidung zwischen organischen und funktionellen
Kontrollbande (C) nach der Inkubation von 12 Minuten gastrointestinalen Erkrankungen verwendet werden
einen bestimmten Wert unterschreitet, ist das Resultat (Ref. 1-7).
ungültig und der Test muss mit einer neuen Die Ergebniskategorien basieren auf Daten aus klinischen
Testkassette wiederholt werden. Studien, die von BÜHLMANN durchgeführt wurden, und
sind Empfehlungen von BÜHLMANN. Alle Testergebnisse
sollten zusammen mit Informationen, die aus den
klinischen Symptomen des Patienten, der Anamnese und
STANDARDISIERUNG anderen klinischen Ergebnissen und Laborbefunden
• Der Quantum Blue® fCAL extended wurde mit Hilfe des verfügbar sind, interpretiert werden.
BÜHLMANN fCAL® ELISA (Art.-Nr.: EK-CAL) Klinische Schwellenwerte
standardisiert.
Die folgenden Daten wurden mit dem BÜHLMANN fCAL®
• Der BÜHLMANN Quantum Blue® Reader verwendet für ELISA erhoben (Bestellcode: EK-CAL).
die Berechnung der Calprotectinkonzentration eine lot- Ergebnisse aus 58 klinischen Proben von mit RDS
spezifische Standardkurve. Der messbare Bereich liegt diagnostizierten Patienten und aus 131 klinischen Proben
zwischen 30 und 1000 µg/g. von mit CED diagnostizierten Patienten aus einer
• Um quantitative Ergebnisse für die Calprotectin- internationalen klinischen Studie wurden herangezogen,
konzentrationen zwischen 850-1800 μg/g zu erhalten, um die in Tabelle 3 angegebenen Werte zu erhalten.
können hohe Proben, die über 850 μg/g anzeigen, mit
dem BÜHLMANN Quantum Blue® high range Test
(Bestellcode: LF-CHR25) erneut getestet werden.
Release date: 2021-09-10 11/44 Quantum Blue® fCAL extendedCalprotectin- unteren Toleranzgrenze von 50 µg/g mit geringerer
Interpretation Nachuntersuchung
konzentration Spezifitätsleistung und einer oberen Toleranzgrenze von
< 80 µg/g Normal Keine 200 µg/g mit etwas geringerer Empfindlichkeit
(Tabelle 7 und 8).
Grauzone/ Nachbeobachtung innerhalb
80 – 160 µg/g
grenzwertig von 4-6 Wochen
> 160 µg/g Erhöht Bei Bedarf wiederholen
II. CED-Überwachung
Tabelle 3 Klinische Schwellenwerte und Beurteilung
Calprotectinwerte unterhalb 80 μg/g Die Bestimmung von Calprotectin im Stuhl ist eine
Calprotectinwerte im Stuhl 160 µg/g deuten auf eine individuelle Patienten-Schwellenwerte durch Bestimmung
neutrophile Infiltration des gastrointestinalen Traktes hin; des Calprotectin-Spiegelausgangswerts des Patienten
daher kann dies ein Zeichen dafür sein, dass eine aktive während der Krankheitsremission festlegen.
entzündliche Erkrankung vorliegt. Entsprechende
weiterführende Untersuchungen durch Fachärzte zur Calprotectin-Werte unterhalb 100 μg/g
Erhaltung einer klinischen Gesamtdiagnose werden Calprotectin-Spiegel im Stuhl unterhalb 100 µg/g können
empfohlen. Patienten mit niedrigem Risiko eines klinischem Rezidivs in
endoskopischer Remission verlässlich identifizieren.
Klinische Beurteilung Invasive endoskopische Verfahren können bei diesen
Die Fähigkeit des BÜHLMANN fCAL® ELISA zwischen Patienten vermieden werden (Ref. 7-18).
Patienten mit CED und anderen nichtentzündlichen GI-
Erkrankungen einschliesslich RDS zu unterscheiden, Calprotectinwerte zwischen 100 und 300 μg/g
wurde in einer klinischen Studie mit insgesamt 337 Calprotectin-Spiegel im Stuhl von 100 bis 300 µg/g können
erwachsenen und pädiatrischen Patienten untersucht. auf die Notwendigkeit einer engmaschigeren Überwachung
Einhundertfünfunddreissig (135) Patienten hatten die im folgenden Zeitraum hinweisen, um Tendenzen der
endgültige Diagnose einer CED (Morbus Crohn, Colitis Krankheitsentwicklung zu beurteilen.
ulcerosa oder unklare Colitis), 130 Patienten hatten RDS Calprotectinwerte oberhalb 300 μg/g
und 72 Patienten stellten sich mit Bauchschmerzen
Bei Calprotectinspiegeln im Stuhl von über 300 µg/g sollte
und/oder Durchfall bzw. anderen GI-assoziierten
die Bestimmung wiederholt und bei Bestätigung erhöhter
nichtentzündlichen Erkrankungen vor (siehe Tabelle 4). Die
Spiegel weitere Untersuchungsverfahren veranlasst
endgültige Diagnose wurde durch Endoskopie sowie
werden (Ref. 7-18).
andere klinische Befunde gestützt.
Die Differenzierung zwischen CED und GI-assoziierten LEISTUNGSMERKMALE
nichtentzündlichen Erkrankungen einschliesslich RDS
wurde mit einer klinischen Empfindlichkeit von 93,3% bei Die folgenden Leistungsmerkmale wurden mit einem
80 µg/g und einer klinischen Spezifität von 83,7% bei Quantum Blue® Reader der 2. Generation erstellt und mit
160 µg/g erreicht. Die ROC-Kurvenanalyse ergab einen einem Quantum Blue® Reader der 3. Generation verifiziert.
AUC von 0,923 (siehe Tabelle 5). Die Daten daher gelten für beide Readergenerationen.
Die Differenzierung zwischen CED und RDS wurde mit Methodenvergleich
einer klinischen Empfindlichkeit von 93,3% bei 80 µg/g und Bias an den klinischen Entscheidungspunkten:
einer klinischen Spezifität von 85,4% bei 160 µg/g erreicht.
Die ROC-Kurvenanalyse ergab einen AUC von 0,933 80 μg/g: 4.2% (95% KI: -2.0 - 19.3%)
(siehe Tabelle 6). 100 μg/g: 2.1% (95% KI: -2.7 - 14%)
Die durch ROC-Analyse definierte optimale Kombination 160 µg/g: -1.1% (95% KI: -4.1 - 6.6%)
von Toleranzgrenzen für diese Patientenpopulationen 300 μg/g: -3.6% (95% KI: -7.0 - 2.3%)
betrug 80 µg/g und 160 µg/g Calprotectin, welches etwas Die Methodenvergleichsstudie wurde gemäss der CLSI-
stringenter ist als die Kombination einer empfindlicheren Richtlinie EP09-A3 durchgeführt. Einhundert-
Release date: 2021-09-10 12/44 Quantum Blue® fCAL extendedsechsundachzig 186 extrahierte klinische Stuhlproben Limit of Quantification (LoQ)
wurden entsprechend der Gebrauchs-anweisung mit dem Unterer LoQ: ≤30 (28,2) µg/g Calprotectin.
Quantum Blue® fCAL extended und dem BÜHMANN fCAL®
Oberer LoQ: ≥1000 (1002) µg/g Calprotectin.
ELISA Test gemessen. Die Messungen wurden an drei
Tagen mit drei Testkassetten-Lots für den Quantum Blue® Der LoQ-Wert wurde gemäss der CLSI-Richtlinie EP17-A
fCAL extended Test durchgeführt (Abbildung 2). bestimmt. Um den unteren LoQ-Wert zu bestimmen,
wurden vier extrahierte Stuhlproben mit Calprotectin-
Wiederfindung: 102%-121% konzentrationen zwischen 19,1 und 37,3 µg/g in zehn
Sechs Stuhlprobenextrakte wurden mit 150 μg/g Replikaten gemessen um 40 Werte zu erhalten
Calprotectin in Kalibratormaterial aus humanem Serum (Tabelle 14). Um den oberen LoQ-Wert zu bestimmen,
aufgestockt. Das ursprüngliche Extrakt wurde mit der wurden fünf extrahierte Stuhlproben mit
entsprechenden Menge an Extraktionspuffer aufgestockt. Calprotectinkonzentrationen zwischen 628 und 1001,7 µg/g
Ursprüngliche und aufgestockte Proben wurden in acht in zehn Replikaten gemessen um 40 Werte zu erhalten
Replikaten gemessen. Es wurde ein Testkassetten-Lot (Tabelle 15). Die Studie wurde mit zwei Testkassetten-Lots
verwendet. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 11 durchgeführt. Referenzwerte für Calprotectin für die
zusammengestellt. extrahierten Stuhlproben wurden mit dem BÜHLMANN
fCAL® ELISA bestimmt. Unter Verwendung des RMS-
Präzision (Wiederholbarkeit): 15,3-19,1% CV Modells, das aus den Präzisions- und
Präzision innerhalb des Labors (within-laboratory Abweichungsschätzungen für jede Probe hervorging,
precision): 18,0-23,0% CV wurde der relative Gesamtfehler berechnet. Der LoQ wurde
Die Wiederholpräzision und Präzision innerhalb des Labors als die niedrigste und höchste Probenkonzentration
wurden nach der CLSI-Richtlinie EP05-A2 durchgeführt. definiert, für den unteren und oberen LoQ-Wert, der für das
Vier extrahierte Stuhlproben, einschliesslich Extrakten mit Akzeptanzkriterium von 30% relativen Gesamtfehlers
erhalten wurde.
Calprotectinwerten nahe an klinischen Entscheidungs-
punkten, wurden über 10 Tage in zwei unabhängigen Linearität: 30-850 μg/g
Testläufen täglich mit zwei Replikaten pro Messung Der lineare Bereich des Quantum Blue® fCAL extended
gemessen. Dabei wurde ein einzelnes Reagenzienlot Tests wurde gemäss der CLSI-Richtlinie EP06-A
verwendet (Tabelle 12). durchgeführt. Um insgesamt 14 Konzentrationsstufen zu
Inter-Lot-Präzision: 16,5-20,6% CV erhalten, die den erwarteten Messbereich abdecken und
Die Inter-Lot-Präzision wurde gemäss der CLSI-Richtlinie höher sind, wurden zwei extrahierte Stuhlproben, mit
niedriger und hoher Calprotectinkonzentration, gemischt.
EP05-A2 durchgeführt. Vier extrahierte Stuhlproben,
einschliesslich Extrakten mit Calprotectinkonzentrationen Die Mischungen wurden mit jeweils zehn Replikaten auf
nahe an klinischen Entscheidungspunkten, wurden mit drei zwei Testkassetten-Lots gemessen. Gemittelte Werte der
unterschiedlichen Reagenzienlots gemessen. Die Calprotectinkonzentrationen wurden für jede Mischung
Messungen wurden über fünf Tage in einem Testlauf gegen den Verdünnungsfaktor aufgetragen, der zur
täglich mit zwei Replikaten pro Messung durchgeführt Herstellung der Mischungen verwendet wurde. Es wurde
(Tabelle 13). sowohl eine lineare Anpassung als auch eine polynomiale
Anpassung zweiter und dritter Ordnung angewendet. Wenn
Limit of Blank (LoB): Koeffizienten der polynomialen Anpassung eines Polynoms
QB2: 6,7 µg/g Calprotectin. der zweiten und dritten Ordnung als signifikant bestimmt
QB3G: 12,5 µg/g Calprotectin. wurden, wurde der lineare Bereich als das Intervall der
Calprotectinkonzentration bestimmt, in dem eine
Der LoB-Wert wurde gemäss der CLSI-Richtlinie EP17-A
Abweichung von der linearen Anpassung, 20% des
mit Extraktionspuffer bestimmt um 60 Blankwerte zu
relativen Konzentrationswerts bzw. 20 μg/g nicht
erhalten. Die Studie wurde mit zwei Testkassetten-Lots
überschreitet (Abbildung 3).
durchgeführt.
High-Dose-Hook Effekt
Limit of Detection (LoD):
Bei Calprotectinkonzentrationen bis zu 1500 µg/g wurde
QB2: 18 µg/g Calprotectin.
kein High-Dose-Hook Effekt beobachtet. Eine Abnahme
QB3G: 20,2 µg/g Calprotectin. des gemittelten Signals unter die obere lineare
Der LoD-Wert wurden gemäss der CLSI-Richtlinie EP17-A Bereichslimite von 850 μg/g wurde für Calprotectin-
bestimmt. Zwei extrahierte Stuhlproben mit konzentrationen über 4000 μg/g abgeschätzt.
Calprotectinkonzentrationen von 58 und 62 µg/g wurden in Es wurde für keines der einzelnen Replikatmessungen ein
Extraktionspuffer verdünnt, um insgesamt sechs Proben Wert unterhalb des höchsten klinischen Entscheidungs-
mit Konzentrationen zwischen 1 x LoB (6,3 µg/g) und 4 x punktes von 300 µg/g beobachtet. Sieben bis acht
LoB (25,1 µg/g) zu erhalten. Die Proben wurden in zehn extrahierte Stuhlproben mit Calprotectinkonzentrationen
Replikaten gemessen um 60 Werte zu erhalten. Die Studie zwischen 1361 µg/g und 13`817 µg/g wurden in fünf
wurde mit zwei Testkassetten-Lots durchgeführt. Replikaten auf drei Testkassetten-Lots gemessen.
Release date: 2021-09-10 13/44 Quantum Blue® fCAL extendedFRANÇAIS STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION
DES RÉACTIFS
UTILISATION PRÉVUE Tous les composants du kit sont stables à 2-8 °C jusqu'à la
Le BÜHLMANN Quantum Blue®
fCAL extended est un test date d’expiration imprimée sur les étiquettes.
de diagnostic in vitro pour la détermination quantitative de
la calprotectine dans les prélèvements de selles humains REACTIFS ET MATERIEL FOURNIS SELON
destiné à aider à l’évaluation de l’inflammation de la LA DEMANDE
muqueuse intestinale. Les résultats du dosage peuvent
Dispositifs d'extraction de selles
aider au diagnostic différenciant une maladie inflammatoire
organique du tractus gastro-intestinal (maladie Les tubes d'extraction de selles décrits ci-après ne sont
inflammatoire chronique de l’intestin ou MICI, pas inclus dans le kit. Ils peuvent être commandés en
spécifiquement maladie de Crohn ou rectocolite même temps que le kit.
hémorragique, RCH) d'une maladie fonctionnelle Kits de dispositifs
Quantité Code
(syndrome du côlon irritable ou SCI) (réf. 1-7), chez les d’extraction
patients souffrant de douleurs abdominales chroniques et Paquets de 50, 200 ou
peuvent également aider au suivi d’une MICI (réf. 7-18). 500 tubes disponibles, B-CALEX-C50
Tube d’extraction chaque tube contenant
Pour utilisation en laboratoire uniquement. CALEX® Cap 5 mL de tampon B-CALEX-C200
Europe : pour utilisation professionnelle. d’extraction B-CALEX-C500
Prêt à l'emploi
PRINCIPE DU TEST 50 tubes, comprenant
Smart-Prep chacun spatules et fonds B-CAL-RD
Le test permet la mesure sélective de l'antigène de la de tube
calprotectine par un dosage immunologique de type 50 tubes constitués d’un
sandwich. Un anticorps monoclonal de capture (mAb) tube, d’un cône et d’un
hautement spécifique de la calprotectine est déposé sur la ScheBo® Quick- embout doseur, chacun
rempli de 1,3 mL de B-CAL-SO50
membrane test. Un second anticorps monoclonal, conjugué PrepTM
tampon d’extraction
à de l’or colloïdal permettant la détection, est présent sur la
Prêt à l'emploi
bande de libération du conjugué. Il est libéré dans le
système après ajout de l'échantillon de selle extrait et dilué. Tableau 2
Le conjugué calprotectine/anti-calprotectine-or se lie à
l'anticorps anti-calprotectine déposé sur la membrane test MATERIEL REQUIS MAIS NON FOURNI
(ligne test) et le restant du conjugué or anti-calprotectine • Vortex pour l’extraction des selles
qui n’a pas réagi se lie à l'anticorps de chèvre anti-souris
déposé sur la membrane test (ligne contrôle). Les • Pipettes de précision avec pointes jetables : 10-100 µL,
intensités de signal de la ligne de test (T) et de la ligne de 100-1000 µL et 250-2500 µL
contrôle (C) sont mesurées quantitativement par le • Centrifugeuse
BÜHLMANN Quantum Blue® Reader. • Tubes jetables en polypropylène ou polystyrène de
5 mL pour la préparation des dilutions d’échantillons
REACTIFS FOURNIS ET PREPARATION • Minuteur (facultatif)
Réactifs Quantité Code Commentaires • Quantum Blue® Reader disponible chez BÜHLMANN
Scellée sous (code de commande : BI-POCTR-ABS)
Cassette test 25 pièces B-LFCALUS-TC vide dans un
sachet • Papier absorbant
1 flacon
Tampon d’extraction
125 mL
B-CAL-EX Prêt à l'emploi PRECAUTIONS
Contrôles 2 flacons Précautions de sécurité
B-CALE-CONSET Prêts à l’emploi
bas* / élevé* 0,5 mL • Les contrôles de cette trousse contiennent des
Carte en composants d’origine humaine. Bien que les tests de
Carte à puce RFID 1 pièce B-CALE-RCC plastique détection de l’antigène de surface du VHB et des
blanche
anticorps des virus VHC et VIH1/2 se soient révélés
Carte en
négatifs, il convient de considérer les réactifs comme
Carte à puce RFID 1 pièce B-CALE-RCC720 plastique
capables de transmettre des maladies infectieuses, et
verte
de les manipuler conformément aux Bonnes Pratiques
Carte en
Carte à code-barres 1 pièce B-CALE-BCC plastique à
de Laboratoire (BPL), en prenant les précautions
code-barres 2D appropriées.
Tableau 1 • Les échantillons des patients doivent être manipulés en
* Les concentrations en calprotectine humaine native des contrôles respectant les Bonnes Pratiques de Laboratoire (BPL)
varient en fonction des lots. Vous référer à la fiche de contrôle qualité
et avec les précautions requises, comme s'ils étaient
pour les concentrations effectives.
susceptibles de transmettre des infections.
• Réactifs : Éviter le contact des réactifs avec la peau, les
yeux ou les muqueuses. En cas de contact, laver
Release date: 2021-09-10 14/44 Quantum Blue® fCAL extendedYou can also read
