Polimorfismos do Gene da Paraoxonase Humana e Risco de Doença Coronária 109
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Polimorfismos do Gene da Paraoxonase
Humana e Risco de Doença Coronária [109]
M. ISABEL MENDONÇA, R. PALMA DOS REIS, ANA I. FREITAS, ANA C. SOUSA, ANDREIA PEREIRA, PAULA FARIA, SUSANA GOMES, BRUNO
SILVA, NUNO SANTOS, MARCO SERRÃO, ILÍDIO ORNELAS, SÓNIA FREITAS, JOSÉ J. ARAÚJO, ANTÓNIO BREHM, A. ALMADA CARDOSO
Unidade de Investigação do Hospital Central do Funchal, Madeira, Portugal; Serviço de Cardiologia do HCF, Funchal, Madeira, Lisboa;
Laboratório de Genética Humana da Universidade da Madeira; Faculdade de Medicina da Universidade Nova de Lisboa, Lisboa, Portugal
Rev Port Cardiol 2008; 27 (12): 1539-1555
RESUMO ABSTRACT
Introdução: As doenças complexas como a Human Paraoxonase Gene
doença das artérias coronárias (DAC), a Polymorphisms and Coronary Artery
hipertensão e a diabetes, são usualmente Disease Risk
causadas pela susceptibilidade individual a
múltiplos genes, factores ambientais e pela Background: Complex diseases such as
interacção entre eles. As enzimas da coronary artery disease (CAD), hypertension
paraoxonase humana (PON), particularmente a and diabetes are usually caused by individual
PON1, têm sido implicadas na patogenia da susceptibility to multiple genes, environmental
aterosclerose e da DAC. Dois polimorfismos factors, and the interaction between them. The
comuns na região codificante do gene, com paraoxonase 1 (PON1) enzyme has been
substituição Glutamina (Q) /Arginina (R) na implicated in the pathogenesis of
posição 192 e Leucina /Metionina na posição atherosclerosis and CAD. Two common
55 influenciam a actividade da PON1. Vários polymorphisms in the coding region of the
estudos têm investigado a associação entre os PON1 gene, which lead to a glutamine
polimorfismos da PON1 e a DAC, com (Q)/arginine (R) substitution at position 192
resultados contraditórios. and a leucine (L)/methionine (M) substitution
Objectivo: 1- Avaliar a associação dos at position 55, influence PON1 activity. Studies
polimorfismos da PON1 com o risco de DAC. have investigated the association between these
2-Estudar a interacção destes polimorfismos polymorphisms and CAD, but with conflicting
com outros situados em genes candidatos results.
diferentes, na susceptibilidade para o Aims: 1) To evaluate the association between
aparecimento da DAC. PON1 polymorphisms and CAD risk; and 2) to
Material e Métodos: Estudámos em 298 study the interaction between PON1
doentes coronários e 298 controlos saudáveis, polymorphisms and others in different
através de um estudo caso/controlo, o risco de candidate genes.
DAC associado aos polimorfismos da PON1, Methods: We evaluated the risk of CAD
192Q/R e 55L/M. Numa segunda fase associated with PON1 Q192R and L55M
avaliámos o risco das interacções polimórficas polymorphisms in 298 CAD patients and 298
PON1 192 RR + MTHFR 1298 AA; PON1 healthy individuals. We then evaluated the risk
192 R/R + ECA DD; PON1 192 R/R + ECA 8 associated with the interaction of the PON1
GG. Finalmente construímos um modelo de polymorphisms with ACE DD, ACE 8 GG and
regressão logística (no qual entraram todas as MTHFR 1298AA. Finally, using a logistic
variáveis genéticas, ambientais e bioquímicas, regression model, we evaluated which variables
que tinham mostrado significância estatística (genetic, biochemical and environmental) were
na análise univariada), para determinar quais linked significantly and independently with
as que se relacionavam de forma significativa e CAD.
independente com DAC. Results: We found that the PON1 55MM
Resultados: Verificámos que o genótipo PON1 genotype was more common in the CAD 1539
Recebido para publicação: Setembro de 2008 • Aceite para publicação: Setembro 2008
Received for publication: September 2008 • Accepted for publication: September 2008
Rev Port Cardiol
Vol. 27 Dezembro 08 / December 08
55 MM tinha uma distribuição superior na population, but this did not reach statistical
população doente mas não atingia significância significance as a risk factor for CAD, while
estatística como factor de risco para DAC. O PON1 192RR presented an 80% higher
PON1 199 RR apresentou um risco relativo relative risk compared to the population
80% superior relativamente à população que o without this polymorphism. The interaction
não possuía (p=0,04). A interacção da PON1 between PON1 192RR and MTHFR 1298AA,
192 RR e da MTHFR 1298 AA, polimorfismos sited in different genes, increased the risk for
sedeados em genes diferentes, apresentou um CAD, compared with the polymorphisms in
risco relativo de DAC de 2,76 isolation (OR=2.76; 95% CI=1.20-6.47;
(OR=2,76;IC=1,20- 6,47; P=0,009), bastante p=0.009), as did the association of PON1
superior ao risco de cada polimorfismo isolado, 192RR with ACE DD, which presented a
assim como a associação da PON1 RR + ECA 337% higher risk compared to the population
DD (com polimorfismos também sedeados em without this polymorphic association
genes diferentes), que apresentou um risco (OR=4.37; 95% CI=1.47-13.87; p=0.002).
337% superior relativamente aos que não Similarly, the association between PON1
possuíam esta associação (OR=4,37;IC=1,47- 192RR and ACE 8 GG was linked to an even
13,87; P=0,002). Da mesma forma a associação higher risk (OR=6.23; 95% CI=1.67-27.37;
entre a PON1 RR e ECA 8 GG, revelou um pM. ISABEL MENDONÇA et al
Rev Port Cardiol 2008; 27: 1539-55
INTRODUÇÃO INTRODUCTION
A doença das artérias coronárias (DAC) é uma
doença multifactorial na qual os factores
genéticos e ambientais desempenham um papel
C oronary artery disease (CAD) is a
multifactorial disease, with genetic and
environmental factors playing an important role
importante na sua etiologia. A tendência familiar in its etiology. Familial aspects of the disease do
está longe de seguir as leis de Mendel. Os dados not follow simple Mendelian laws, and the
acumulados na literatura e resultantes da scientific evidence accumulated over recent
investigação científica dos últimos anos, sobre a years on the pathophysiology and genetics of this
fisiopatologia e genética destas doenças complex disease indicates that there is unlikely to
complexas, levam-nos a concluir ser pouco be a single gene that is responsible for its genetic
provável a existência de um gene “major”, único component (1, 2).
responsável pelo contributo genético nesta Paraoxonase 1 (PON1) is an antioxidant
afecção.(1,2) esterase synthesized in the liver that circulates in
Paraoxonase1 (PONI 1) é uma enzima anti- the plasma, bound exclusively to high-density
oxidante, uma esterase sintetizada no fígado, que lipoproteins (HDL), particularly apolipoprotein
circula no plasma exclusivamente ligada às A-I and J. Evidence has recently been found that
lipoproteínas das HDL, nomeadamente (AI e J). HDL interferes with the oxidation of low-density
Evidências recentes sugerem a intervenção das lipoproteins (LDL) through the action of enzymes
HDL na inibição da oxidação das LDL, sendo associated with HDL, including PON1, which
este processo o resultado da acção de algumas prevent LDL particles from undergoing oxidative
enzimas que lhe estão associadas (incluindo a modification by hydrolyzing lipid peroxides (3). In
PON1), que, ao hidrolisarem os peróxidos most studies, paraoxonase’s antioxidant activity is
lipídicos, podem prevenir as partículas LDL measured by its ability to hydrolyze organo-
de sofrer modificação oxidativa.(3) Na maioria phosphates such as the pesticide paraoxon.
dos estudos a actividade anti-oxidante da Studies have shown that the antioxidant
paraoxonase sérica é determinada pela sua properties of PON1, which confer its
capacidade de hidrolizar organofosfatos como o atheroprotective effect, are determined
paroxon, usado como pesticida. genetically; reduced PON1 activity increases
Vários estudos evidenciam que existe uma oxidative stress and CAD risk (4).
determinante genética responsável pela Two common polymorphisms in the coding
actividade antioxidante da PON 1 que, por sua region of the PON1 gene, which lead to a
vez, é responsável pela função ateroprotectora da glutamine (Q)/arginine (R) substitution at
mesma. Se os niveis de actividade da PON1 position 192 and a leucine (L)/methionine (M)
estão reduzidos, aumenta o stress oxidativo e o substitution at position 55, influence PON1
risco de DAC.(4) activity. The R and M alleles are associated with
Dois polimorfismos comuns na região reduced PON1 activity and lower mRNA levels
codificante do gene, com substituição de and hence may be a risk factor for CAD (5).
aminoácidos: a substituição de Glutamina (Q) por Increased PON1 activity has been observed in
Arginina (R) na posição 192 (codão 192) e a de individuals with the PON1 192RR and 55LL
Leucina (L) por Metionina (M) na posição 55. genotypes compared to those with PON1 192QQ
Estas substituições influenciam a actividade da and 55MM by other investigators, suggesting that
PON1, tendo sido os alelos R e M associados com the former have a lower risk for CAD (6). PON1
actividade PON mais baixa e níveis de mRNA can act on different substrates (paraoxon,
inferiores, podendo representar um factor de risco diazoxon, soman, etc.); however, its hydrolytic
para DAC.(5) Outros investigadores encontraram activity on these substrates can vary. According
actividade enzimática da PON1 mais elevada nos to Mackness et al., paraoxonase’s protective effect
indivíduos PON1 192 RR e PON1 55 LL, em against LDL oxidation is inversely proportional to
relação aos indivíduos PON1 192 QQ e PON1 55 its ability to hydrolyze paraoxon (7). Various
MM, levando-nos a admitir a existência nos studies have set out to determine whether
primeiros de uma menor predisposição para individuals with the PON1 192RR or 55MM
doença coronária. (6) No entanto, o substracto em genotypes have greater susceptibility for CAD 1541Rev Port Cardiol
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que a PON1 actua pode variar, assim como a sua than those with the Q or L allele, with conflicting
actividade hidrolítica em relação a esse results (8-11).
substracto (paraoxon, diazoxon, soman, etc). Furthermore, these polymorphisms do not act
Segundo Mackness, a capacidade de protecção in isolation; they must be considered in the
efectuada pela enzima paraoxonase em relacção à clinical context in which conventional risk
oxidação das LDL é oposta à sua actividade factors, as well as other polymorphisms, can
hidrolítica em relação ao paraoxon. Assim, a strengthen or weaken both their harmful and
enzima pode ser mais activa ao hidrolizar o protective effects.
paroxon e menos activa na protecção da oxidação Against this background, the aims of this
das LDL.(7) Numerosos estudos têm sido study were: 1) to evaluate the association between
conduzidos no sentido de investigar se os PON1 polymorphisms and CAD risk; and 2) to
indivíduos com o genótipo PON1 192 RR da study the interaction between PON1
paraoxonase ou PON1 55 MM, apresentam uma polymorphisms and others in different candidate
maior susceptibilidade para DAC, em relação aos genes.
que possuem o alelo Q ou L. No entanto os
resultados têm sido contraditórios. (8-11)
Acresce que os polimorfismos não actuam METHODS
isolados, e há que entendê-los na realidade
clínica, no contexto dos factores de risco This was a case-control study with a total of
convencionais e até da presença de outros 596 subjects, mean age 55.5±9.3 years, 78.9%
polimorfismos que podem agravar ou atenuar os male. The cases (n=298), mean age 55.0±10.3
seus efeitos, quer lesivos quer protectores. years and 78.0% male, were selected
Nestas circunstâncias, o objectivo deste consecutively between 2003 and 2005 following
estudo foi: 1- Avaliar a associação dos hospital discharge from patients admitted with
polimorfismos da PON1 com o risco de DAC. 2- myocardial infarction or coronary artery disease
Estudar a interacção destes polimorfismos com confirmed by coronary angiography that showed
outros situados em genes candidatos diferentes, at least 75% obstruction of at least one coronary
na susceptibilidade para o aparecimento da DAC. artery. The controls (n=298), mean age 55.5±8.0
years and 73.5% male, were selected randomly
from the electoral register from individuals with
MÉTODOS no history or suggestion of CAD. The use of the
electoral register to select the controls was
Estudo caso-controlo, incluindo um total intended to ensure that they did not differ
de 596 indivíduos, com idade média 55,5 ± significantly from the cases in terms of gender
9,3 anos sendo 78,9% do sexo masculino. Os and age.
casos (n=298) com idade média 55,0 ± 10,3 In the control group, the presence of
anos, 78,0% do sexo masculino, foram cardiovascular disease was an exclusion
seleccionados de forma consecutiva, entre 2003 criterion, and so all underwent physical
e 2005 após alta hospitalar, de entre os examination and, if necessary, complementary
doentes com internamento por Enfarte do exams. All subjects completed a questionnaire
Miocárdio ou Doença Coronária, confirmada por giving demographic and other data including age,
coronáriografia com pelo menos 75% de place of birth and residence, history of
obstrução de um dos vasos coronários. Os hypertension or diabetes, smoking habits, alcohol
controlos (n=298), idade média 55,5 ± 8,0 anos, intake, and quantity and type of physical
73,5% do sexo masculino, foram seleccionados exercise. Their weight, height, waist and hip
aleatoriamente dos cadernos eleitorais de entre circumference, heart rate and blood pressure (BP)
os indivíduos sem antecedentes ou história were measured.
sugestiva de doença coronária. A selecção Subjects were classified as having arterial
dos controlos a partir dos cadernos eleitorais hypertension (AH) if they reported the fact, were
pretendeu que estes não fossem signifi- taking antihypertensive medication or had
cativamente diferentes dos casos, em termos de systolic BP of >140 mmHg and/or diastolic BP of
1542 sexo e idade. >90 mmHg, based on the mean of threeM. ISABEL MENDONÇA et al
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No grupo controlo, a presença de doença measurements (12). They were classified as having
cardiovascular era critério de exclusão do diabetes if they were taking oral antidiabetics or
estudo, pelo que eram todos submetidos a um insulin or if their fasting plasma glucose was
exame clínico e, se necessário, a exames higher than 7.0 mmol/l or 126 mg/dl (13).
complementares. Todos os indivíduos comple- Body mass index (BMI) was calculated as
tavam um questionário que incluía dados weight in kilograms divided by height in meters
demográficos: idade, local de nascimento e squared, with obesity defined as a BMI of >30 (14).
residência, existência prévia de hipertensão Subjects were considered to be smokers if
arterial (HTA), diabetes mellitus, hábito de they smoked or had ceased less than five years
fumar, ingestão de álcool, quantidade e tipo de previously. Dyslipidemia was defined as total
actividade física. Procedia-se também ao registo fasting cholesterol of >5.2 mmol/l or 200 mg/dl,
do peso, altura, perímetro da cintura e anca. A LDL cholesterol of >3.4 mmol/l or 130 mg/dl,
todos era efectuada a determinação da frequência HDL cholesterol of 5.0, and
Os doentes eram classificados como tendo triglycerides of >1.5 mmol/l or 150 mg/dl, as well
Hipertensão Arterial (HTA) se referiam este as being considered present in individuals taking
antecedente, cumpriam medicação antihiper- lipid-lowering medication (15).
tensora ou apresentavam uma pressão arterial In all subjects (cases and controls) we
sistólica >140 mmHg e / ou uma pressão evaluated the PON1 Q192R and L55M
diastólica >90 mmHg, na média de três polymorphisms and then evaluated the
medições. (12) Considerava-se existir diabetes caso interaction between these polymorphisms and
fossem utilizados antidiabéticos orais, ou others that univariate analysis showed to be
insulina, ou o valor da glicémia basal fosse associated with increased risk of CAD: PON1
superior a 7,0 mmol/l ou 126 mg/dl. (13) 192RR + MTHFR 1298AA; PON1 192RR +
O Índice de Massa Corporal (IMC) foi ACE DD; and PON1 192RR + ACE 8 GG.
calculado pela fórmula peso/altura2, sendo a Blood samples were collected from cases and
obesidade definida como um índice de massa controls for biochemical and genetic analysis.
corporal superior a 30 Kg/m2. (14) The study protocol was approved by the hospital’s
O indivíduo foi considerado fumador se Ethics Committee and all participants gave their
fumava ou tinha menos de 5 anos de abstenção informed consent.
tabágica. A dislipidémico foi considerada se
o seu nível de colesterol total em jejum era > 5,2 Biochemical analysis
mmol/L ou 200 mg/dL, o colesterol de LDL > 3,4 To determine serum glucose, total, HDL and
mmol/L ou 130 mg/dL, HDL < 40 mg/dL com LDL cholesterol and triglycerides, blood samples
uma relação colesterol total / colesterol HDL >5,0 were extracted after 14-16 hours’ fasting, placed
e os triglicéridos > 1,5 mmol/L ou 150 mg/dL, ou in dry tubes and centrifuged half an hour later at
se o indivíduo cumpria medicação anti- 3500 g. Serum levels of total, LDL, HDL
dislipidémica .(15) cholesterol and triglycerides were quantified by
Estudamos em todos (casos e controlos) os an enzymatic technique using a Hitachi 911 auto-
polimorfismos da PON1, 192Q/R e 55L/M e, analyzer. A direct enzymatic technique was
numa segunda fase, avaliámos o risco das used for HDL and LDL cholesterol. Biochemical
interacções polimórficas com outros poli- risk markers (lipoprotein(a), apolipoprotein B100,
morfismos que na análise univariada se and high-sensitivity C-reactive protein [hs-CRP])
associaram ao aumento de risco de DAC: PON1 were quantified by nephelometry using a Behring
192 RR + MTHFR 1298 AA; PON1 192 R/R + BN 100 automatic system. Homocysteine was
ECA DD; PON1 192 R/R + ECA 8 GG. measured by fluorescence polarized immunoassay
Casos e controlos colheram sangue para using an Abbot IMX automatic device.
determinações bioquímicas e genéticas e todos os To measure fibrinogen, samples were also
participantes deram o seu consentimento taken with the patient fasting and placed in a tube
informado, tendo o protocolo do estudo tido a containing sodium citrate, and measurements
aprovação prévia da Comissão de Ética do were taken with a Behring BCS automatic
Hospital. analyzer. 1543Rev Port Cardiol
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Análises Bioquímicas: Genetic analysis
Para determinar as concentrações séricas de Genomic DNA was extracted from 80 µl of
glucose, colesterol total, triglicerídeos, colesterol peripheral blood using a standard phenol-
HDL e colesterol LDL, o sangue era extraído após chloroform method and ethanol precipitation. All
14 a 16 horas de jejum, em tubo seco e era the polymorphisms under study were genotyped
centrifugado meia hora depois a 3.500 g. Os by the polymerase chain reaction (PCR) in a
valores de colesterol total, colesterol LDL, HDL e Hybaid thermocycler.
triglicéridos eram quantificados no soro, com um
auto analisador “Hitachi 911” através de uma PON1 L55M
técnica enzimática. Para o colesterol HDL e LDL The L55M mutation of the PON1 gene was
usamos uma técnica enzimática directa. Os genotyped using the forward primer 5'-GAA GAG
marcadores bioquímicos de risco: Lp (a), TGA TGT ATA GCC CCA G-3' and reverse
apolipoproteína B100, e proteína C reactiva de primer 5'-TTT AAT CCA GAG CTA ATG AAA
alta sensibilidade (PCRas) eram quantificados GCC-3'. PCR was performed for 40 cycles of one
por um aparelho automático ”Behring” BN 100, min at 95 ºC, 30 sec at 61 ºC and 45 sec at 72 ºC.
pela técnica de Nefelometria. A homocisteína era The PCR products were digested using the
determinada pela técnica de Imunoensaio de restriction enzyme NlaIII (New England Biolabs)
Fluorescência Polarizada (FPIA), num aparelho for 6 hours and the restriction products were
automático IMX (Abbot). visualized on T9C5 polyacrylamide gel. The L
Em relação ao fibrinogénio a colheita era allele consisted of a 170-bp fragment and the
também feita com o doente em jejum, para tubo mutated M allele consisted of two fragments, of
com citrato de sódio, utilizando-se um analisador 126 and 44 bp (Figure. 2).
automático “Behring BCS“.
PON1 Q192R
The Q192R mutation of the PON1 gene was
O DNA genómico foi extraído a partir de 80 µl
Análise Genética:
identified by amplification with the forward
de sangue periférico usando um método standard primer 5'-TAT TGT TGC TGT GGG ACC TGA G-
fenol-clorofórmio com precipitação por acção do 3' and reverse primer 5'-CAC GCT AAA CCC
etanol. Todos os polimorfismos estudados foram AAA TAC ATC CTC-3'. The reaction conditions
genotipados pela reacção de polimerização em were 40 cycles of one min at 94 ºC, 30 sec at 61
cadeia (PCR) num termociclador Hybaid. ºC and 1 min at 72 ºC. The resulting PCR
products were digested with AlwI restriction
PON 55 L/M enzyme (New England Biolabs) for 6 hours and
A mutação L55M do gene PON foi tipada por the restriction products visualized on T9C5
amplificação com os primers: forward 5’ - GAA polyacrylamide gel. The Q allele consisted of a
GAG TGA TGT ATA GCC CCA G -3’ e reverse 5’ 99-bp fragment and the mutated R allele
- TTT AAT CCA GAG CTA ATG AAA GCC -3’. consisted of two fragments, of 66 and 33 bp
As condições de reacção foram 40 ciclos de 1 (Figure. 2).
minuto a 95ºC, 30 segundos a 61ºC e 45 segundos
a 72ºC. Os produtos de PCR foram digeridos com ACE I/D
a enzima de restrição NlaIII (New England The following primers were used: forward 5'-
Biolabs) durante 6 horas e os produtos de GCC CTG CAG GTG TCT GCA GCA TGT-3' and
restrição visualizados em gel de poliacrilamida reverse 5'-GGA TGG CTCTCC CCG CCT TGT
T9C5. O alelo L apresentava um fragmento de CTC-3'. Around 100 ng of DNA from each
170 pb e o alelo mutado M apresentava dois individual was subjected to 40 cycles of one min
fragmentos, 126 e 44 pb. (Figura 2). at 94 ºC, one min at 62 ºC and one min at 72 ºC.
The amplification products, 597 bp in the case of
PON 192 Q/R the I (insertion) allele and 319 bp in the case of
A mutação Q192R do gene PON foi the D (deletion) allele, were identified by T9C5
determinada por amplificação com os primers: polyacrylamide gel electrophoresis. Due to the
forward 5' - TAT TGT TGC TGT GGG ACC TGA preferential amplification of the D allele, all the
1544 G - 3' e reverse 5' - CAC GCT AAA CCC AAA samples presenting the DD genotype were re-M. ISABEL MENDONÇA et al
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TAC ATC CTC - 3'. As condições de reacção amplified using primers specific for insertion:
foram de 40 ciclos de 1 minuto a 94ºC, 30 forward 5'-TGG GAC CAC AGC GCC CGC CAC
segundos a 61ºC e 1 minuto a 72ºC. Os produtos TAC-3' and reverse 5'-TCG CCA GCC CTC CCA
de PCR assim obtidos foram digeridos com a TGC CCA TAA-3' (16) (Figure. 1).
enzima de restrição AlwI (New England Biolabs)
durante 6 horas e os produtos de restrição ACE 8 A/G
visualizados em gel de poliacrilamida T9C5. O The A/G polymorphism of the angiotensin-
alelo Q apresentava um fragmento de 99 pb e o converting enzyme (ACE) gene (ACE 8), located
alelo mutado R apresentava dois fragmentos, com on exon 17, has been linked to high levels of
66 e 33 pb.(Figura 2) circulating ACE. The polymorphism was
genotyped by PCR followed by digestion using
ECA I/D the restriction enzyme BstUI (New England
Para o estudo do polimorfismo I/D no intrão Biolabs), and an artificial restriction site was
16 do gene da ECA foram utilizados os seguintes introduced by primer mismatch: forward 5'-CTG
primers: forward 5’ - GCC CTG CAG GTG TCT ACG AAT GTG ATG GCC GC-3' and reverse 5'-
GCA GCA TGT -3’ e reverse 5’ - GGA TGG TTG ATG AGT TCC ACG TAT TTC G-3'. The
CTCTCC CCG CCT TGT CTC -3’. Cerca de 100 reaction conditions were 40 cycles of 30 sec at 95
ng de DNA de cada indivíduo foram submetidas ºC, 45 sec at 62 ºC and 45 sec at 72 ºC. A 126-bp
a 40 ciclos de 1 min a 94ºC, 1 minuto a 62ºC e 1 fragment was indicative of the A allele and two
minuto a 72ºC. Os produtos de amplificação, 597 fragments of 21 and 105 bp indicated the
pb no caso do alelo I (inserção) e 319 pb no caso presence of the G allele (Figure. 1).
do alelo D (delecção), foram identificados por
electroforese em gel de poliacrilamida T9C5. Methylenetetrahydrofolate reductase
Devido à preferencial amplificação do alelo D, (MTHFR)
todas as amostras que apresentavam o genótipo When sequencing was required to detect the
DD foram re-amplificadas com primers MTHFR A1298C polymorphism, the 163-bp
específicos para a inserção: forward 5’ - TGG fragment, following amplification and purification
GAC CAC AGC GCC CGC CAC TAC -3 e in Sephadex columns (Sigma), was subjected to
reverse 5’ - TCG CCA GCC CTC CCA TGC CCA asymmetrical amplification using a BigDye kit in
TAA -3’. (16) (Figura 1) a Trio Thermoblock thermocycler (Biometra).
Sample processing and PCR procedures were as
ECA 11860 A/G (ECA 8) recommended by the manufacturer with slight
Localizado no exão 17, pode estar associado a modifications. Each sequencing reaction used 1-
níveis elevados de ECA circulante. O 3 µl DNA, depending on the quantity obtained
polimorfismo A/G do gene do ECA (ECA 8), foi after purification of the PCR product, 1.4 µl
tipado por amplificação por PCR, seguida de BigDye 3.1 (Applied Biosystems), and 1.5 µl (5
restrição com a enzima BstUI (New England pmol) primer, plus sterile distilled water, to make
Biolabs), sendo que para tal foi necessário up a final volume of 10 µl. The samples then
introduzir um sítio de restrição artificial por underwent 5 min of denaturation at 96 ºC, 30
primer mismatch: forward 5’-CTG ACG AAT cycles at 96 ºC for 10 sec, 50 ºC for 5 sec and 60
GTG ATG GCC GC-3’ e reverse 5-TTG ATG ºC for 4 min, ending with a final extension step of
AGT TCC ACG TAT TTC G-3. As condições de 10 min at 60 ºC. The sequences were read in an
amplificação foram de 40 ciclos de 30 segundos a ABI Prism 310 genetic analyzer (Applied
95ºC, 45 segundos a 62ºC e 45 segundos a 72ºC. Biosystems) (Figure. 1).
Um fragmento de 126 pb era indicativo da
pesença do alelo A e dois fragmentos de 21 e 105 Statistical analysis
pb indicavam a presença do alelo G. (Figura 1) The Student’s t test and one-way ANOVA were
used to compare means between groups. Multiple
Metiltetrahidrofolato Reductase (MTHFR) comparisons were performed using Tukey’s post
Quando necessária a sequenciação na hoc test. The chi-square test was used to compare
detecção dos polimorfismos (MTHFR A1298C), o frequencies of genotypes and alleles in cases and
fragmento de 163 pb amplificado e purificado em controls. Allele frequencies were deduced from 1545Rev Port Cardiol
Vol. 27 Dezembro 08 / December 08
Figura 1. Polimorfismos da
Paraoxonase 1 (PON1 55L/M e
PON1 192 Q/R)
Figure 1. Polymorphisms of
paraoxonase 1 (PON1) (L55M
and Q192R)
Figura 2. Polimorfismos do
Enzima de Conversão da
Angiotensina (ECA) I/D, ECA 8
A/G e MTHFR A1298C
Figure 2. Polymorphisms of
angiotensin-converting enzyme
(ACE) (I/D, ACE 8 A/G) and
methylenetetrahydrofolate
reductase (MTHFR) (A1298C)
colunas de Sephadex Sigma, foi submetido a genotype distribution and tested for Hardy-
amplificação assimétrica das cadeias usando o kit Weinberg equilibrium (HWE) using Pearson’s
Big Dye, num termociclador TRIO-Thermoblock chi-square test to compare the genotype
Biometra. Os protocolos utilizados para o frequencies observed and those expected from
processamento das amostras e as condições de HWE (17, 18). The risk associated with the two PON1
PCR para a sequenciação foram os recomendados polymorphisms was expressed as odds ratios and
pelos fornecedores, com ligeiras modificações. 95% confidence intervals.
Assim sendo, cada reacção de sequenciação To determine possible interactions between
continha 1-3 µl de ADN (dependente da the two PON1 genotypes and between the PON1
quantidade em ng obtida após a purificação do RR192 genotype and the MTHFR 1298 AA,
produto da amplificação), 1,4 µl de Big Dye 3.1 ACE 8 GG and ACE DD genotypes, a 4x2 table
Applied Biosystems, 1,5 µl de primer (5 mmol) e was constructed and additive and multiplicative
sdw para perfazer um volume final de 10 µl. As models used to assess synergy and
amostras eram então submetidas a 5 min de antagonism (19, 20).
desnaturação a 96ºC, 30 ciclos de 96ºC por 10 s, Finally, a backward Wald logistic regression
50ºC por 5 s e 60ºC por 4 min, finalizando com model was constructed, adjusted for age, gender,
uma extensão final de 10 min a 60ºC. As conventional risk factors, biochemical markers
sequências foram lidas num sequenciador ABI and the genotypes under study, in order to
Prism 310 Genetic Analyser Applied Biosystems evaluate which variables were linked
(Figura 1). significantly and independently with CAD. The
level of significance was taken as p=0.05. All
Análise Estatística continuous variables were expressed as means ±
O teste T de Student e one way ANOVA foram standard deviation (SD). All calculations were
usados para comparar médias entre grupos. As made using SPSS for Windows version 14.0.
comparações múltiplas foram efectuadas pelo
teste post hoc (Tukey). O teste do χ2 foi usado
1546 para comparações entre frequências genotípicas eM. ISABEL MENDONÇA et al
Rev Port Cardiol 2008; 27: 1539-55
alélicas (casos e controlos). As frequências RESULTS
alélicas foram deduzidas da distribuição
genotípica e para testar o equilíbrio de Hardy- As expected, the cases included a higher
Weinberg (EHW), usámos o teste de Pearson do proportion with a family history of CAD, diabetes
χ2 (com as frequências genotípicas observadas e and dyslipidemia; they were more likely to be
as frequências genotípicas esperadas obtidas pelo smokers, had a higher alcohol intake, and had
EHW).(17,18) Para avaliar o risco associado aos higher values for pulse wave velocity (PWV),
genótipos dos 2 polimorfismos PON1 foi fibrinogen, high-sensitivity C-reactive protein
calculado o Odds Ratio e os seus respectivos (hs-CRP) and lipoprotein(a) (Table I).
intervalos de confiança de 95%. With regard to PON1 polymorphisms, the
Para determinar possíveis interacções Q192 and L55 alleles were more frequent in our
sinérgicas/antagónicas entre os dois genótipos da population than 192R and 55M (Table II).
PON1 e entre o genótipo RR da PON 192 com os The LM genotype on codon 55 was the most
genótipos AA da MTHFR 1296, GG da ECA common (0.49), followed by LL (0.33); the least
11860 A/G e DD da ECA I/D, foi elaborada uma common was MM (0.17). The most common
tabela 4x2 e efectuadas as medidas de genotype for codon 192 was QR, followed by QQ
sinergismo ou antagonismo no modelo aditivo e and RR (Table III).The Pearson’s chi-square test
multiplicativo .(19, 20) for the L55M polymorphism showed:
χ2 = Σ ----------- = 0,098 the 5% level of signifi-
Finalmente foi construído um modelo de (O-E)2
regressão logística backward wald ajustado para a
E
idade, sexo, factores de risco clássicos,
marcadores bioquímicos e genótipos estudados cance for one degree of freedom is 3.84 and the
para determinar quais as variáveis que estavam value obtained was lower, the null hypothesis (H0)
associadas de forma independente e significativa was not rejected, hence the polymorphism in our
com a DAC. Foi aceite um limiar de significância population was in Hardy-Weinberg equilibrium.
de p=0,05. Todas as variáveis contínuas foram For the Q192R polymorphism, our population
expressas em média ± desvio padrão (SD). Para was not in HWE, as the Pearson’s chi-square test
todos os cálculos foi usado o software para value was greater than 3.84:
χ2 = Σ ----------- = 10,08
Windows, SPSS versão 14.0.
(O-E)2
E
Quadro I. Características basais da população estudada
Table I. Baseline characteristics of the study population
Variáveis Variables Casos (n=298) Controlos (n=298) Valor de P
Cases (n=298) Controls (n=298) P
Idade (anos) Age (years) 55,0 ± 10,3 55,5 ± 8,0 NS
Sexo Masculino (%) Male (%) 235 (78,9%) 219 (73,5%) NS
DAC Familiar (%) Family history of CAD (%) 114 (38,3%) 52 (17,4%)Rev Port Cardiol
Vol. 27 Dezembro 08 / December 08
Quadro II. Frequência alélica Table II. Allele frequency
PON L55M População total PON1 L55M Total population
Alelo L 692 (0,58) L allele 692 (0.58)
Alelo M 500 (0,42) M allele 500 (0.42)
PON Q192R População total PON1 Q192R Total population
Alelo Q 764 (0,64) Q allele 764 (0.64)
Alelo R 428 (0,36) R allele 428 (0.36)
Quadro III. Frequência genotípica Table III. Genotype frequency
PON L55M População total PON1 L55M Total population
LL 199 (0,33) LL 199 (0.33)
LM 294 (0,49) LM 294 (0.49)
MM 103 (0,17) MM 103 (0.17)
PON Q192 R População total PON1 Q192 R Total population
QQ 227(0,38) QQ 227 (0.38)
QR 310 (0,52) QR 310 (0.52)
RR 59 (0,1) RR 59 (0.1)
RESULTADOS It can be seen from Table IV that the
homozygotic PON1 55MM mutation was found in
Olhando a população em estudo verificamos a higher proportion of cases (19.1%) than controls
que os casos, como era de esperar, apresentam (15.4%), although this did not reach statistical
uma percentagem mais elevada de história de significance. The homozygotic 192RR mutation
antecedentes familiares, fumam mais, têm uma was more common in the cases (12.4%) than in
maior percentagem de diabetes, de dislipidémia, the controls (7.4%), with statistically significant
consomem mais álcool, apresentam valores mais difference, and the CAD risk was 78% higher for
elevadas, de fibrinogénio, PCR-as e de lipo- this genotype when compared to individuals
proteína (a) (Quadro 1). without it. (Table IV). Of the other homozygous
Na nossa população e em relação aos mutations in genes considered risk factors for
polimorfismos da PON 1, a frequência dos alelos CAD, the ACE DD genotype has an 85% higher
Q 192 e L 55 é superior em relação à do R 192 risk of CAD than other genotypes; for the ACE 8
e M 55 (Quadro 2). GG genotype the risk is 49% higher, while for the
O genótipo LM da PON1 no codão 55 é o mais MTHRF 1298AA genotype it is 36% higher
comum (0,49), seguido do LL (0,33) e depois do (Table V).
MM (0,17), o menos comum. Em relação ao PON Table VI, a 4x2 table, shows that associating
1 codão 192, na nossa população o genótipo QR the two homozygous PON1 mutations that
é o mais frequente, seguido do QQ e por fim do previous studies have demonstrated represent
RR (Quadro 3). greater CAD risk (55MM and 192RR), the risk
O polimorfismo da PON 55 L/M encontrava- increases slightly. The association of two
se em equilíbrio de Hardy- Weinberg (EHW), na mutations affecting different physiological
nossa população tendo sido efectuado o teste de systems, PON1 192RR and MTHFR 1928,
Pearson do χ2 = Σ ----------- = 0,098
(O-E)2 increases the risk 2.76 times; the indices of
E synergy in the additive model show that risk of
Sendo o nível de significância de 5% para 1 CAD is 2.55 times higher, while in the
grau de liberdade = 3,84 e como o valor obtido é multiplicative model it is 1.53 times higher.
inferior a 3,84, não rejeitamos a hipótese nula The association of PON1 192RR and ACE 8
1548 (H0) logo a população está em equilíbrio de GG leads to a considerable increase in risk (6.23M. ISABEL MENDONÇA et al
Rev Port Cardiol 2008; 27: 1539-55
Quadro IV. Possibilidade de risco de DAC dos polimorfismos PON155 MM e 192RR
Table IV. CAD risk of PON1 55MM and 192RR polymorphisms
Polimorfismo Casos Controlos OR (IC -95%) Valor- p
Polymorphism Cases (n=298) (%) Controls (n=298) (%) OR (95% CI) p
PON1 55MM 57 (19.1) 46 (15.4) 1.30 (0.85-1.99) NS
PON1 192RR 37 (12.4) 22 (7.4) 1.78 (1.02-3.10) 0.040
OR: odds ratio; CI: confidence interval
Quadro V. Possibilidade de risco de DAC dos polimorfismos genéticos ECA DD, ECA 8 GG e MTHFR 1298 AA
Table V. CAD risk of ACE DD, ACE 8GG and MTHFR 1298AA polymorphisms
Polimorfismo Polymorphism Casos (n=298) Controlos (n=298) Odds Ratio (IC 95%) Valor- p
Cases (n=298) (%) Controls (n=298) (%) OR (95% CI) p
ECA DD ACE DD 124 (41,6%) 83 (27,9%) 1,85 (1,31-2,60)Rev Port Cardiol
Vol. 27 Dezembro 08 / December 08
Quadro VI. Interacções, sinergismos/antagonismos, entre a associação dos dois genótipos da PON 1 sedeados no mesmo gene e outros
polimorfismos sedeados em genes diferentes, no risco de DAC
Table VI. Interactions (synergistic or antagonistic) between the association of two PON1 polymorphisms and polymorphisms in different genes
affecting CAD risk
PON1 55 MM PON1 55MM PON1 192 RR PON1 192RR CASOS (298) CONTROLOS (298) OR (IC 95%) VALOR - p
Cases (n=298)(%) Controls (n=298) (%) OR (95% CI) p
- - - - 236 (79,2) 249 (83,6) Referência / Reference 0,936
- - + + 25 (8,4) 27 (9,1) 0,98 (0,53-1,80) 0,437
+ + - - 5 (1,7) 3 (1,0) 1,76 (0,36-9,38) 0,056
+ + + + 32 (10,7) 19 (6,4) 1,78 (0.94-3,36)
PON1 192 RR PON1 192RR MTHFR 1298 AA MTHFR 1298AA
- - - - 126 (42,3) 151 (50,7) Referência / Reference 0,136
- - + + 135 (45,3) 125 (41,9) 1,29 (0,91-1,84) 0,414
+ + - - 14 (4,7) 12 (4,0) 1,40 (0,58-3,36) 0,009
+ + + + 23 (7,7) 10 (3,4) 2,76 (1,20-6,47)
PON1 192 RR PON1 192RR ECA 8 GG ACE 8 GG
- - - - 167 (56,0) 195 (65,4) Referência / Reference 0,099
- - + + 94 (31,5) 81 (27,2) 1,36 (0,93-1,98) 0,444
+ + - - 21 (7,0) 19 (6,4) 1,29 (0,64-2,60) 0,001
+ + + + 16 (5,4) 3 (1,0) 6,23 (1,67-27,37)
PON1 192 RR PON1 192RR ECA DD ACE DD
- - - - 154 (51,7) 198 (66,4) Referência / Reference 0,002
- - + + 107 (35,9) 78 (26,2) 1,76 (1,21-2,57) 0,230
+ + - - 20 (6,7) 17 (5,7) 1,51 (0,73-3,15) 0,002
+ + + + 17 (5,7) 5 (1,7) 4,37 (1,47-13,87)
OR: odds ratio; CI: confidence interval
Cálculo dos Índices de Sinergia /Antagonismo:
S=1 não existem interacções na exposição a ambos os factores; S 1 aumento no
efeito da exposição a ambos os factores.
Calculation of indices of synergy/antagonism:
S=1: no interaction in exposure to both factors; S 1: increase in effect of
exposure to both factors
SI (MM + RR) = 0,78 / (-0,02 + 0,76) = 1,05 SIM = 1,78 / 0,98 X 1,76 = 1,03
SI (RR + AA) = 1,76 / (0,29 + 0,40) = 2,55 SIM = 2,76 / 1,29 X 1,40 = 1,53
SI (RR + DD) = 3,37 / (0,76 + 0,51) = 2,65 SIM = 4,37 / 1,76 X 1,51 = 1,64
SI (RR + GG) = 5,23 / (0,36 + 0,29) = 8,05 SIM = 6,23 / 1,36 X 1,29 = 3,55
SI: Índice sinergético aditivo; SIM: Índice sinergético multiplicativo
SI: additive synergistic index; SIM: multiplicative synergistic index
possibilidade cerca de 49% superior de vir a DISCUSSION
sofrer de DAC, relativamente aos que não
possuem este genótipo e os que possuem o Despite its moderate sample size, this case-
genótipo da metiltetrahidrofolato Reductase control study has the merit of enabling
(MTHFR) 1298 AA, têm uma possibilidade de assessment of the risk associated with two
contrair DAC cerca de 36% superior em relação polymorphisms of the PON1 gene, showing that
aos que não possuem este genótipo. (Quadro 5) the PON1 55MM polymorphism does not present
Se observarmos o quadro 6 (tabela 4X2) significant CAD risk but that the 192RR variant
verificamos que ao associarmos os dois genótipos is associated with a risk with borderline
mutados em homozigotia que, em estudos significance.
anteriores têm representado risco para as However, while the increased CAD risk from
1550 populações estudadas e se encontram sediados no isolated polymorphisms is slight, it becomesM. ISABEL MENDONÇA et al
Rev Port Cardiol 2008; 27: 1539-55
Quadro VII. Variáveis que de forma independente se associaram com DAC
Table VII. Variables independently associated with CAD risk
Variáveis Variables B SE. Wald df Sig. Exp(B)
Antecedentes de doença familiar Family history of CAD (%) 1,200 0,228 27,606 1Rev Port Cardiol
Vol. 27 Dezembro 08 / December 08
nogénio, PCR (as) PON 192 Q/R, Similar frequencies have been found in Italy,
ECA I/D, ECA 11860 A/G (ECA 8), PON 55 Spain, Denmark and the United Kingdom, but in
L/M, MTHFR A1298C, MTHFR1298 AA * Asian populations the M allele is rare and the
PON 192 RR, ECA11860 GG (ECA8) * PON MM genotype may be non-existent, while the LM
192 RR, ECA DD * PON 192 RR, PON 55 genotype is uncommon and LL is the most
MM * PON 192 RR. frequent in Japan, Thailand, China and Malaysia.
No quadro 7 verificamos que ficaram na The genotype distribution in our population is
equação, como variáveis independentes de DAC, also similar to that of Europeans and white
os antecedentes de doença familiar, hábito de Americans, in whom the PON1 55LM genotype is
fumar, diabetes, fibrinogénio, Lp (a), ECA DD, the most common, followed by LL, with MM the
MTHFR AA e a associação ECA 11860 GG least common. For codon 192 of the PON1 gene,
(ECA 8) + PON 192 RR. the QR genotype was the most common in our
population, followed by QQ and then RR. In
Asian populations the RR genotype is most
DISCUSSÃO frequent, followed by QR, with QQ the rarest.
This ethnic variability in allele frequency may
Apesar da dimensão moderada da amostra explain variations in the activity of paraoxonase
este estudo de caso / controlo apresenta algumas in different populations, resulting in differences
virtualidades, pois permite avaliar o risco ligado in the toxicity of organophosphates such as
às duas variantes polimórficas da PON1, paraoxon, diazoxon, and sarin, and hence in
rejeitando que a PON55 MM apresente risco morbidity and mortality, as well as in
significativo de DAC e mostrando um risco com susceptibility to CAD (21, 22).
significância marginal com a variante RR da The PON1 L55M polymorphism was in
PON192. Hardy-Weinberg equilibrium in our population,
Mas, se em relação aos polimorfismos isolados unlike PON1 Q192R, which did not present the
o risco acrescido de DAC é moderado, de acordo expected equilibrium, possibly due to a higher
com o presente estudo, este risco ganha uma proportion of heterozygotes in the control group.
muito maior importância quando os This would appear to confirm the increased CAD
polimorfismos negativos se associam, surgindo risk presented by the homozygous mutation
um modelo de risco multiplicativo, semelhante ao PON1 192RR in our study (OR=1.778; 95% CI
observado na associação dos factores de risco 1.022-3.095; p=0.04).
tradicionais. After multivariate analysis, none of the PON1
Destacamos também um aspecto relevante no L55M or Q192R genotypes in isolation was an
modelo utilizado: no estudo multivariado, independent risk factor for CAD. Our results
recorrendo à regressão logística, por um método confirm previous studies in which the
matemático automático de decisão fixa, foram homozygous RR genotype of the PON1 192 codon
seleccionados, como factores conducentes ao was always a weak risk factor for CAD when
aparecimento de DAC, vários factores de risco analyzed separately (23). It may, however, have a
tradicionais e alguns factores genéticos. A much stronger effect if it interacts with harmful
entrada dos factores de risco tradicionais com environmental factors or other genetic factors that
elevados graus de significância sugere-nos a increase CAD risk.
correcção do modelo, valorizando assim os A synergistic association between two genes
polimorfismos seleccionados pelo mesmo método. belonging to the same physiological system (the
Verificamos, no presente estudo, que o renin-angiotensin system) has been found in
consumo médio de álcool na nossa população de some studies (24). Genetic predisposition to CAD
doentes coronários é mais elevado (55,6 ± 83,2 appears to be the result of cumulative effects of
g/dia) do que na população controlo (38,7 ± 54,6 various polymorphisms, which increase risk only
g/dia) com um valor de p=0,003 No presente slightly when present in isolation.
trabalho, a média do valor do consumo alcoólico Genetic risk may be amplified or modulated
(55,6 ± 83,2 g/dia), quando corrigida para todos by various gene/gene and gene/environment
os outros factores de risco de DAC, através de interactions (25). The concept of gene/gene
1552 análise multivariada (regressão logística), não interactions may be extended to include geneticM. ISABEL MENDONÇA et al
Rev Port Cardiol 2008; 27: 1539-55
aumentou o risco de DAC de forma significativa variants in the human genome that have
(OR=1,002; IC 0,99-1,00; p=0,154), apesar de protective and/or suppressive effects. It is
ter permanecido na equação. important to identify such variants, since they
Pelo contrário, após análise multivariada, can influence disease manifestation and
os fumadores apresentaram uma possibilidade pathophysiology (26). In the present study, the
de risco de DAC cerca de 150% superior, em interaction between the PON1 192RR
relação aos não fumadores. Também a diabetes polymorphism and the ACE 8 GG polymorphism
mostrou ser um factor de risco independente e (Table VI) showed a strong synergistic effect,
muito significativo na nossa população (OR = increasing risk for CAD from 36% (GG genotype
2,747; IC 1,60-4,71; pRev Port Cardiol
Vol. 27 Dezembro 08 / December 08
p=0,04). diferentes enzimas e pertencendo a sistemas
Em relação aos polimorfismos estudados e fisiopatológicos distintos, aumentou sempre de
após análise multivariada, nenhum dos genótipos forma marcada o risco de eclosão da DAC.
da PON 1 55L/M ou 192 Q/R, isoladamente, Após correcção para os outros factores de
representou ser factor de risco independente para risco clássicos e bioquímicos, a associação PON1
DAC. Os nossos resultados confirmam trabalhos 192 RR + ECA 8 GG, continuou a ser um factor
prévios em que o genótipo em homozigotia RR da de risco significativo e independente para DAC, o
PON 1 Q/R foi sempre um débil factor de risco que comprova que os factores genéticos são
para DAC, quando analisado isoladamente. (23) importantes assim como a sua interacção, para o
Pode, no entanto, apresentar um efeito muito aparecimento da Doença Coronária.
mais acentuado se interagir com factores Podemos portanto concluir que múltiplas
ambientais nocivos ou outros genes considerados pequenas deficiências genéticas (polimorfismos)
de risco para DAC. e factores ambientais (factores de risco
Uma associação sinérgica, entre dois genes convencionais) interagem para o aparecimento
diferentes mas pertencentes ao mesmo sistema desta complexa patologia.
fisiopatológico (SRA), foi confirmada em alguns
estudos.(24) A predisposição genética para DAC,
parece ser a resultante final dos efeitos AGRADECIMENTOS
cumulativos de vários polimorfismos genéticos,
que conferem um risco moderadamente Os autores agradecem ao Sr. Dr. Richard Maul
aumentado se presentes como único factor de todo o apoio e colaboração prestado nas
risco. traduções.
O risco genético poderá ser ampliado e
modulado através de várias interacções gene/
gene e gene/ ambiente. (25) O conceito de
interacção gene-gene pode estender-se à
identificação de variantes genéticas protectoras/
supressoras, no nosso genoma, sendo a sua
identificação importante, na medida em que a sua
existência pode modular a manifestação da
doença e alterar a sua fisiopatologia.(26) Também
no presente estudo (Quadro 6) a interacção entre
o genótipo RR da PON 1 Q/R e o genótipo GG da
ECA 8 A/G, mostrou um elevado efeito sinérgico
ao aumentar a possibilidade de risco de DAC de
36% (genótipo GG isolado) para 523%
(associação ECA GG + PON 1 RR). Esta
associação ficou na equação da regressão
logística multivariada mostrando ser um factor de
risco independente para DAC (OR=14,1; IC 1,6-
126,5; p=0,018).
Pedidos de separatas para:
CONCLUSÕES Address for reprints:
O genótipo PON1 192 RR apresentou, se MARIA ISABEL MENDONÇA
avaliado isoladamente, neste estudo caso- Unidade de Investigação do Hospital Central do Funchal
controlo, um risco de DAC cerca de 80% Hospital Central do Funchal
superior relativamente à população que não 9000 Funchal, PORTUGAL
possuía este genótipo (p=0,04). Tel: +351.291.744312
A associação com outros polimorfismos Fax: +351.291.744312
1554 sedeados em genes diferentes, codificando para e-mail: dep.card@srs.ptM. ISABEL MENDONÇA et al
Rev Port Cardiol 2008; 27: 1539-55
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